变形链球菌UA159葡萄糖基转移酶B催化活性区的基因克隆及表达

作     者：玉佳男 田晶 李宝丽 张永霞 刘睿 YU Jia-nan;TIAN Jing;LI Bao-li;ZHANG Yong-xia;LIU Rui

作者机构：华中农业大学食品科学技术学院环境食品学教育部重点实验室湖北武汉430070 普健生物(武汉)科技有限公司湖北武汉430070 

基　　金：国家自然科学基金(31271939) 

出 版 物：《现代食品科技》 (Modern Food Science and Technology)

年 卷 期：2015年第31卷第5期

页      码：71-75 129,129页

摘      要：为获得具有良好生物活性的可溶性葡萄糖基转移酶催化活性区(GTFB/CAT),根据NCBI上已发表的Streptococcus mutans UA159(血清型c)GTFB的DNA测序结果,按照GTFB/CAT两端的序列设计引物,利用PCR克隆技术钓取*** UA159(血清型c)的GTFB/CAT基因,连入表达载体p ET-28b(+)中构成p ET-28b(+)-GTFB/CAT重组体,将重组载体转入大肠杆菌BL21(*** BL21)宿主菌中进行诱导表达,最佳诱导条件为37℃或30℃、4 h、诱导剂IPTG的浓度为1 mmol/L,产物经Ni2+-NAT树脂亲和层析纯化,得到了不可溶的GTFB/CAT包涵体,包涵体通过变性-复性最终得到可溶性蛋白,产物经SDS-PAGE分析表明,在44 ku处有一明显条带,与预期蛋白分子量一致,蛋白纯度约为80%,采用Somogyi法测得GTFB/CAT蛋白的比酶活为1.66 IU/mg。研究表明:成功克隆GTFB/CAT基因并通过在*** BL21原核体系中表达得到有生物活性的可溶性蛋白,为后续研究GTF的抗结剂及预防龋齿的效果及机理奠定了基础。

主 题 词：变形链球菌UA159(血清型c) 葡萄糖基转移酶催化活性区 基因表达 克隆 比酶活 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 07[理学] 

核心收录：

D　O　I：10.13982/j.mfst.1673-9078.2015.5.012

馆 藏 号：203118244...