牛病毒性腹泻病毒一步法微滴数字PCR检测方法的建立与初步应用

作     者：叶京飞 郭利 刘占悝 李建友 李智杰 孙飞雁 董清平 程悦宁 YE Jing-fei;GUO Li;LIU Zhan-kui;LI Jian-you;LI Zhi-jie;SUN Fei-yan;DONG Qing-ping;CHENG Yue-ning

作者机构：中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室吉林长春130112 吉林农业科技学院吉林木吉林132109 肈源县畜牧水产技术服务中心黑龙江大庆166500 

基　　金：吉林省科技发展计划基金项目(20200301016RQ,20210202101NC) 吉林农业科技学院博士科研启动基金项目(吉农院合字第7008号) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第53卷第1期

页      码：1-8页

摘      要：为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)一步法微滴数字PCR(RT-ddPCR)方法,本研究在一步法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法的基础上,设计BVDV的特异性引物和探针,对RT-ddPCR试验中的反转录酶、退火温度、引物和探针浓度以及检测方法的反应条件进行优化。同时对其特异性、敏感性、重复性进行评估。结果显示,建立的RT-ddPCR方法最佳反转录体系为商品化一步法数字PCR试剂盒配套试剂、引物和探针终浓度分别为900 nmol/L和250 nmol/L,最佳退火温度为57℃;用本方法检测常见疫病病毒时结果呈阴性;本方法最低检测限为3.2 copies/μL,重复性好,且变异系数小于5%。采用RT-ddPCR和RT-qPCR对24份牛源拭子样品进行检测,检测结果显示所建方法优于RT-qPCR方法。本研究建立的RT-ddPCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,适用于临床样品的核酸检测,为牛病毒性腹泻病毒感染的早期检测和定量诊断提供了技术支持。

主 题 词：牛病毒性腹泻病毒 一步法 微滴式数字PCR 定量检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0018

馆 藏 号：203118257...