乐都紫皮大蒜4种病毒多重RT-PCR检测技术的建立

作     者：张超 董怡衡 岳苗 卫唯 张谦 王乐 尹卫 王煜伟 梁健 ZHANG Chao;DONG Yiheng;YUE Miao;WEI Wei;ZHANG Qian;WANG Le;YIN Wei;WANG Yuwei;LIANG Jian

作者机构：青海大学省部共建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室青海西宁810016 

基　　金：青海省科技计划项目(2019-NK-106) 

出 版 物：《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 (Journal of Northwest A&F University(Natural Science Edition))

年 卷 期：2023年第51卷第1期

页      码：120-129页

摘      要：【目的】建立乐都紫皮大蒜4种病毒的多重RT-PCR快速检测方法,为大蒜病毒病病原鉴定、脱毒效果验证等提供技术支撑。【方法】根据乐都紫皮大蒜RNA全长转录组测序结果,分别设计洋葱黄矮病毒(onion yellow dwarf virus,OYDV)、大蒜潜隐病毒(garlic latent virus,GLV)、大蒜D病毒(garlic virus D,GarVD)和大蒜X病毒(garlic virus X,GarVX)4种病毒的外壳蛋白特异性引物,筛选不同引物,优化引物用量、模板用量、退火温度等条件,并进行了多重RT-PCR的灵敏度检测和12份引进栽培大蒜种质资源的病毒检测。【结果】通过优化筛选,在一个PCR反应体系中实现了OYDV(1232 bp)、GLV(831 bp)、GarVD(506 bp)和GarVX(116 bp)4种病毒的多重检测,最优反应条件为退火温度55℃,模板用量2.5μL,混合引物用量1.0μL。多重RT-PCR的灵敏度略低于单一RT-PCR。对引进的12份栽培大蒜资源进行4种病毒的多重RT-PCR检测发现,有5份资源存在4种病毒,4份资源存在2种病毒,3份资源存在1种病毒。对7份资源中经多重PCR未检测到的病毒,使用单一RT-PCR进行检测和验证发现,除1份内蒙古资源(NMG)的1种病毒(GarVX)外,多重RT-PCR结果与单一RT-PCR检测结果一致。【结论】本研究建立的大蒜多重RT-PCR体系可靠性强,可用于大蒜病毒的检测与防控。

主 题 词：乐都紫皮大蒜 病毒检测 多重RT-PCR 洋葱黄矮病毒 大蒜潜隐病毒 大蒜D病毒 大蒜X病毒 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 0902[农学-自然保护与环境生态类] 090202[090202] 

核心收录：

D　O　I：10.13207/j.cnki.jnwafu.2023.01.014

馆 藏 号：203118289...