重组人ICOS胞外区原核表达载体的构建及表达

作     者：李文秀 周凤云 毛伟平 潘杨滨 何志娟 徐翀 刘宣宣 

作者机构：南京师范大学生命科学学院/江苏省分子医学重点实验室江苏南京210046 

基　　金：江苏省教育厅自然科学基金(编号:08KJD350002) 

出 版 物：《江苏农业科学》 (Jiangsu Agricultural Sciences)

年 卷 期：2011年第39卷第2期

页      码：45-47页

摘      要：构建重组人ICOS胞外区原核表达载体,并进行初步表达。根据GenBank基因库中ICOS胞外区基因序列设计引物,用RT-PCR法从人T淋巴瘤细胞Jurkat的总mRNA中扩增出ICOS胞外区基因并运用重叠延伸PCR技术扩增出ICOS胞外区同源二聚体,并将ICOS胞外区同源二聚体插入到原核表达载体PET-28a中,并对重组质粒进行鉴定。转化***21,IPTG诱导表达目的蛋白。结果获得ICOS胞外区同源二聚体基因大小为757 bp,构建的重组表达载体中目的基因序列完全正确。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在***21(DE3)中高效表达,相对分子质量约为31 ku。这说明成功地构建人重组ICOS胞外区同源二聚体的原核表达载体,并实现在大肠杆菌中大量表达。为下一步蛋白纯化及制备抗ICOS单克隆抗体奠定了基础。

主 题 词：ICOS Jurkat细胞 pET-28a质粒 重叠延伸PCR 原核表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-1302.2011.02.013

馆 藏 号：203118392...