miR-302d的载体构建及其与Tle4基因的靶向关系验证

作     者：吴宇慧 席一凡 张文慧 程富富 胡菜 赵宗仪 陈欣雨 李熠 张亚妮 WU Yuhui;XI Yifan;ZHANG Wenhui;CHENG Fufu;HU Cai;ZHAO Zongyi;CHEN Xinyu;LI Yi;ZHANG Yani

作者机构：扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 温州肯恩大学计算机科学与技术学院浙江温州325035 

基　　金：国家重点研发计划项目(2021YFD1200305) 国家自然科学基金项目(32272857) 

出 版 物：《中国家禽》 (China Poultry)

年 卷 期：2023年第45卷第2期

页      码：20-26页

摘      要：试验旨在探究精原干细胞(SSCs)形成过程中的关键miR-302d行使功能的分子机制。试验克隆mi R-302d前体序列并连入PGMLV-CMV-MCS-EF1-Zs Green1-T2A-Puro构建mi R-302d过表达载体(mi R-302d mimics);合成mi R-302d的干扰靶点并连入PGMLV-SC5载体构建mi R-302d干扰载体(mi R-302d inhibitor)。通过生物信息预测获得mi R-302d靶基因并构建其3′UTR的野生型(WT)和突变型载体(MT);将mi R-302d过表达载体分别与WT和MT载体共转染DF-1和293T细胞,检测靶基因3′UTR的活性。同时检测在DF-1细胞中过表达或干扰mi R-302d后靶基因的表达变化。结果显示:成功构建mi R-302d的过表达和干扰载体;预测结果显示Tle4为mi R-302d的潜在靶基因,且该基因为ESCs分化为SSCs过程的重要基因;双荧光素酶活性检测结果显示不论是在DF-1还是293T细胞中,与转染WT+mi R-NC组相比,转染WT+mi R-302d组的双荧光素酶活性显著下降(P0.05),且过表达mi R-302d后下调Tle4的表达,而干扰mi R-302d后上调Tle4的表达。结果表明,miR-302d可直接调节靶基因Tle4的表达。

主 题 词：miR-302d Tle4 双荧光素酶报告检测 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 090501[090501] 

D　O　I：10.16372/j.issn.1004-6364.2023.02.004

馆 藏 号：203118402...