慢病毒介导的RNAi对大鼠SOCS3基因表达的抑制作用

作     者：张旭 刘正娟 吴鸣 滕懿群 骆秋龙 陈俊国 陆燕 章爱莲 ZHANG Xu;LIU Zheng-juan;WU Ming;TENG Yi-qun;LUO Qiu-long;CHEN Jun-guo;LU Yan;ZHANG Ai-lian

作者机构：嘉兴市第二医院儿科浙江嘉兴314000 大连医科大学附属第二医院儿科辽宁大连116027 

基　　金：国家自然科学基金(30771798) 辽宁省自然科学基金(20072165) 

出 版 物：《中国微生态学杂志》 (Chinese Journal of Microecology)

年 卷 期：2011年第23卷第10期

页      码：877-880页

摘      要：目的研究慢病毒表达载体介导的RNA干扰(RNAi)对大鼠下丘脑细胞中细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)的抑制作用。方法根据大鼠SOCS3基因(NM053565),用Ambion在线软件选择3个靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamHⅠ和XhoⅠ酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-lenti-GFP连接产生pRNA-Lenti-SOCS3-GFP慢病毒重组质粒,与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取逐孔稀释滴度法测定病毒滴度,然后转染大鼠下丘脑细胞,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR方法检测RNAi组(siRNA1,siRNA2,siRNA3)、空白细胞组和阴性序列组(siRNA-Negtive)中SOCS3的表达情况。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。系列稀释法检测慢病毒悬液的滴度为1.0×1010 TU/L。荧光实时定量PCR检测显示慢病毒感染大鼠下丘脑细胞后,与空白细胞组相比,3个RNAi组都有不同程度的抑制SOCS3表达,其中siRNA1组的抑制效果最好,可使SOCS3 mRNA表达下调达80%。结论构建的pRNA-Lenti-SOCS3-GFP慢病毒载体可有效地抑制大鼠SOCS3的表达,为以SOCS3基因为靶点的相关疾病的基因治疗研究奠定基础。

主 题 词：细胞因子信号转导抑制因子3 核糖核酸干扰 慢病毒载体 下丘脑细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100202[100202] 10[医学] 

D　O　I：10.13381/j.cnki.cjm.2011.10.015

馆 藏 号：203118587...