基于DNA条形码、多重PCR、荧光定量PCR对九香虫及其混伪品进行鉴定

作     者：王孟虎 孙一帆 左亚锋 孟祥松 栗进才 俞浩 许亮 康廷国 

作者机构：亳州学院安徽亳州236800 辽宁中医药大学辽宁大连116600 亳州职业技术学院安徽亳州236800 

基　　金：辽宁省“百千万人才工程”资助项目 安徽高校自然科学研究项目(KJ2021A1143,KJ2020A0765) 亳州学院科研项目(BYZ2017C02,BYZXKTD202004,BYH202108) 高校学科(专业)拔尖人才(gxbjZD2020095) 

出 版 物：《赤峰学院学报（自然科学版）》 (Journal of Chifeng University(Natural Science Edition))

年 卷 期：2023年第39卷第2期

页      码：60-65页

摘      要：目的:基于DNA条形码、多重PCR、荧光定量PCR对市售九香虫、小皱蝽及其掺杂样品进行鉴定。方法:利用通用引物COI进行扩增并测序,构建NJ系统发育树、二级结构并计算种内种间遗传距离;基于COI序列设计九香虫、小皱蝽特异性引物并进行电泳,比较电泳条带;基于COI引物进行SBYR荧光定量PCR,观察单一样品及不同比例混合样品的熔解曲线及其Tm值。结果:利用MEGA 11.0软件分析显示九香虫、小皱蝽分别单独聚为一支,其种间遗传距离均大于0.22,种内遗传距离均小于0.02;两者的二级结构在整体框架具有明显不同。基于特异性引物扩增的九香虫、小皱蝽均出现单一条带,不同比例的混合样品与混合引物进行扩增均出现2条条带。基于COI引物扩增的九香虫、小皱蝽熔解曲线Tm值分别为75℃、89℃,不同比例混合样品的熔解曲线Tm值分别在75.00℃、89.00℃出现两个峰值。结论:DNA条形码能够及二级结构准确鉴定九香虫、小皱蝽;多重PCR及基于SBYR荧光定量PCR不仅能够准确对单一九香虫、小皱蝽进行鉴定,也能够对不同比例的混合样品进行准确鉴定。

主 题 词：DNA条形码 多重PCR 荧光定量PCR 二级结构 九香虫 

学科分类：100703[100703] 1007[医学-药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-260X.2023.02.013

馆 藏 号：203118690...