基于E165R基因非洲猪瘟LAMP快速检测方法的建立

作     者：林涛 陈珺煜 王成龙 李芹 张怀东 刘峰 LIN Tao;CHEN Junyu;WANG Chenglong;LI Qin;ZHANG Huaidong;LIU Feng

作者机构：福建师范大学生命科学学院福建福州350117 工业微生物发酵技术国家地方联合工程研究中心福建福州350117 

基　　金：福建省自然科学基金项目(2020J01181) 

出 版 物：《贵州农业科学》 (Guizhou Agricultural Sciences)

年 卷 期：2023年第51卷第3期

页      码：82-88页

摘      要：【目的】建立特异性好、灵敏度高的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)快速检测方法,为非洲猪瘟的实时实地快速检测提供参考。【方法】通过对非洲猪瘟病毒多种基因型66个毒株的E165R基因多序列比对,选取相对保守区域设计LAMP引物,并对反应条件及反应体系进行优化。在获得的最优反应条件及体系下考察方法的检测特异性和灵敏性。【结果】选取的LAMP检测靶标235 bp(29~264 bp)在不同基因型ASFV毒株中保守性较好,序列相似度达94.46%~100%;LAMP反应的最佳温度为64℃、时间为35 min、Mg 2+浓度为8 mmol/L、内外引物比为8︰1、Bst DNA聚合酶量为16 U。建立的ASFV环介导等温扩增检测方法最低检测限为50 copies/μL,较常规PCR检测提高1个数量级,且35 min即可完成扩增反应。LAMP检测方法与猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸道综合症病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)4种临床症状类似的猪病毒感染性疫病没有交叉反应。【结论】基于该新检测靶点的ASFV LAMP检测具有良好的特异性,可成功区分与ASFV感染临床症状相似的猪感染性疾病,且灵敏度优于常规PCR检测方法,方法简单、检测成本低,可实现ASFV的特异、灵敏、快速检测。

主 题 词：非洲猪瘟病毒 E165R基因 环介导等温扩增 快速检测 特异性 灵敏性 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-3601.2023.03.011

馆 藏 号：203118728...