降钙素原基因克隆表达及多克隆抗体的制备

作     者：谭倩 田卫群 王礼 彭威 陈凡 

作者机构：武汉大学医学院湖北武汉430071 湖北大学生命科学院湖北武汉430062 

基　　金：国家自然科学基金(30801014) 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2013年第29卷第5期

页      码：504-506页

摘      要：目的克隆、表达降钙素原(PCT),制备相应的多克隆抗体。方法根据GenBank上PCT的基因序列,设计10条用于基因拼接的DNA引物,利用PCR技术扩增PCT基因并构建pGEX-KG-PCT重组质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白PCT-GST,然后用融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,Western blot法进行生物活性鉴定,并利用琼脂免疫扩散实验检测了多克隆抗体的特异性和效价。结果成功获得PCT全长基因,重组质粒pGEX-KG-PCT在大肠杆菌中成功表达,SDS-PAGE电泳显示蛋白相对分子质量(Mr)大小为36 000左右。利用纯化的蛋白同时制备了GST和PCT-GST多克隆抗体,琼脂免疫扩散实验显示多克隆抗体可以特异性识别PCT,效价为1∶4。结论成功克隆、表达并纯化出PCT蛋白,制备了相应的多克隆抗体。

主 题 词：降钙素原 克隆表达 多克隆抗体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 100102[100102] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13423/j.cnki.cjcmi.006824

馆 藏 号：203119427...