一种减毒肺炎链球菌溶血素突变体的构建与表达

作     者：吴凯峰 张薇薇 崔亚利 张雪梅 胥文春 庞丹 刘鑫 王虹 WU Kaifeng;ZHANG Weiwei;CUI Yali;ZHANG Xuemei;XU Wenchun;PANG Dan;LIU Xin;WANG Hong

作者机构：重庆医科大学医学临床检验诊断学教育部重点实验室重庆市400016 上海市浦东新区宣桥社区卫生服务中心防保科上海市201314 

基　　金：基金项目:重庆市科委自然科学基金(No.2009BB5397) 

出 版 物：《医学分子生物学杂志》 (Journal of Medical Molecular Biology)

年 卷 期：2010年第7卷第5期

页      码：395-400页

摘      要：目的使用重叠PCR方法构建构建△Al46Ply突变体，原核可溶性表达△Al46Ply蛋白，并明确其毒力变化情况；分析肺炎链球菌溶血素（pneumolysin，Ply）在不同血清型肺炎链球菌（streptococcus pneumoniae，SPN）中的表达情况。方法以SPND39型基因组DNA为模板设计合成构建突变体pry基因所需引物；利用重叠PCR方法扩增合成△Al46ply突变体。通过溶血实验分析其溶血活性，利用中和试验验证△A146Ply诱导产生的特异性抗体中和野生Ply毒素溶血能力，并利用Western印迹检测5株不同血清型肺炎链球菌流行菌株中Ply蛋白表达情况。结果突变体基因测序结果显示，Plyl46位密码子GCT3个碱基被缺失，△Al46ply突变体构建成功，并实现了△Al46Ply的可溶性表达，得到纯度〉90％的重组蛋白。△A146Ply蛋白浓度为100000ng／ml亦未表现出溶血活性。△Al46Ply蛋白诱导产生的特异性抗体能够中和野生Ply毒素的溶血活性。Western印迹结果显示，△Al46Ply诱导产生的多克隆抗体可与国内临床常见4株肺炎链球菌有交叉反应。结论△Al46Ply蛋白是一种安全的肺炎链球菌疫苗候选分子，可刺激机体产生具有中和作用的特异性抗体。

主 题 词：肺炎链球菌 溶血素 重叠PCR 突变体 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3870/j.issn.1672-8009.2010.05.004

馆 藏 号：203119500...