靶向结缔组织生长因子shRNA慢病毒表达载体的构建及病毒包装

作     者：于颖 陈有信 YU Ying;CHEN You-xin

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院眼科北京市100730 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(H1205) 

出 版 物：《中国基层医药》 (Chinese Journal of Primary Medicine and Pharmacy)

年 卷 期：2011年第18卷第13期

页      码：1733-1734,I0003页

摘      要：目的构建靶向结缔组织生长因子（CTGF）的shRNA慢病毒载体并检测其介导的RNA干扰（RNAi）对人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）CTGF表达的影响，为进一步研究CTGF在增殖性玻璃体视网膜病变（PVR）中的功能奠定基础。方法设计并合成三对针对CTGF的siRNA，通过WesternBlot筛选有效靶点，合成有效靶点的Oligo DNA，退火形成双链DNA，与线性化的pGC-LV-GFP载体连接，通过PCR筛选阳性克隆并进行DNA测序鉴定；将重组CTGFshRNA的质粒与病毒包装的辅助质粒共转染295T细胞，将包装产生的慢病毒感染ARPE-19细胞，WesternBbt检测CTGF的表达。结果通过双酶切和基因测序证实靶向CT-GF的shRNA慢病毒载体构建成功，Western Blot证实经慢病毒感染后的ARPE-19细胞中的CTGF的蛋白水平明显减低。结论成功构建了靶向CTGF的shRNA慢病毒表达载体，体外感染ARPE-19细胞可有效降低CTGF蛋白的表达，为深人研究CTGF在PVR中的功能提供了有力的工具。

主 题 词：胞间信号肽类和蛋白质类 RNA干扰 慢病毒感染 色素上皮,眼 印迹法,Far-Western 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100212[100212] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1008-6706.2011.13.003

馆 藏 号：203119531...