特异性抑制人骨肉瘤细胞中EAG1基因表达的短发卡RNA筛选和鉴定

作     者：吴进 吴欣宇 丁真奇 施建东 WU Jin;WU Xin-yu;DING Zhen-qi;SHI Jian-dong

作者机构：厦门大学附属东南医院骨科漳州363000 厦门大学附属东南医院内分泌科漳州363000 

基　　金：解放军南京军区科技创基金资助项目(10MA077) 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2012年第29卷第4期

页      码：715-718页

摘      要：目的筛选出能高效抑制骨肉瘤细胞株MG63中人EAG1（hEAG1）基因表达的短发卡RNA（shRNA）。方法根据人EAG1信使RNA（mRNA）的序列，设计合成4对不同的且能干扰hEAG1基因表达的shRNA。利用同源重组技术构建pGeneSil—hEAG1干扰载体，经酶切及测序鉴定后体外转染MG63细胞。采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白印迹法（Westernblot）分别检测hEAG1mRNA和蛋白的表达。结果成功合成4对shRNA。细胞转染结果显示48h后实验组和对照组均有强荧光表达，转染率为70％。pGeneSil—hEAG1—2组的干扰效果最为明显，hEAG1mRNA和蛋白表达较对照组明显下调，与其他组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论成功筛选出的shRNA可高效阻断hEAG!的表达，可能成为骨肉瘤靶向性治疗的新策略。

主 题 词：骨肉瘤 钾离子通道 短发卡RNA 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2012.04.053

馆 藏 号：203119575...