2型猪链球菌β-半乳糖苷酶基因的克隆表达及酶活性测定

作     者：张凤玉 胡丹 龚秀芳 郑峰 潘秀珍 王长军 

作者机构：南京军区军事医学研究所南京210002 南京医科大学基础医学院南京210029 

基　　金：国家自然科学基金(31170124,81171527,81172794,31300119) 科技部传染病专项基金(2013ZX10004103-004,2013ZX10004801-004,2013ZX10004218-008) 江苏省自然科学基金(BK2011097,BK2012080) 军队“十二五”项目(AWS11C001&AWS11L009)资助项目 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2014年第34卷第2期

页      码：39-44页

摘      要：目的:克隆表达2型猪链球菌β-半乳糖苷酶(BgaC)编码基因,并测定其酶活性。方法:根据05ZYH33基因组序列设计引物,PCR扩增bgaC基因,构建重组表达质粒pET28a-bgaC,转化*** BL21,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物通过SDS-PAGE鉴定;最后对表达产物进行亲和层析纯化,获得BgaC纯化蛋白后测定其酶活性。结果:bgaC基因在原核细胞中得到高效表达,重组表达的BgaC分子质量约为69kDa,其酶促反应最适温度为42℃,最佳反应时间为30min,最适反应pH为5.5,最佳底物浓度为10mmol/L。2型猪链球菌BgaC的体外酶活为1615U/ml,酶比活为1076U/mg。结论:2型猪链球菌强毒力株05ZYH33中含有bgaC基因,在原核系统高效表达的BgaC具有良好的酶学活性。

主 题 词：2型猪链球菌 β-半乳糖苷酶 克隆 酶活性 Streptococcus suis serotype 2 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13523/j.cb.20140207

馆 藏 号：203119751...