HeLa细胞中Zwint-1选择剪接亚型v7的表达鉴定

作     者：苏景华 李蕊 刘俊 周艳琳 陈小璇 代剑平 王革非 李康生 SU Jing-hua;LI Rui;LIU Jun;ZHOU Yan-lin;CHEN Xiao-xuan;DAI Jian-ping;WANG Ge-fei;LI Kang-sheng

作者机构：汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室广东汕头515041 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31300761) 

出 版 物：《癌变．畸变．突变》 (Carcinogenesis,Teratogenesis & Mutagenesis)

年 卷 期：2014年第26卷第2期

页      码：117-122页

摘      要：目的:验证在HeLa细胞系中是否存在Zwint-1 v7选择性剪切亚型的mRNA和蛋白产物。方法:在缺失片段两侧设计引物,利用PCR和克隆测序验证HeLa细胞中是否存在缺失片段的mRNA;构建Zwint-1 v7 3′端特异区段(Z7)的GST融合表达载体pGEXKG-GST-Z7,转化入BL21菌种诱导表达,菌体经超声破碎和2 mol/L尿素洗涤纯化,融合蛋白经SDS-PAGE电泳并切胶回收后作为抗原与佐剂混合乳化并免疫C57BL/6小鼠,收获多克隆抗血清Anti-Z7,采用Dot b lot检测多克隆抗体的效价,Western blot检测HeLa细胞全蛋白中的Z7蛋白产物。结果:PCR和测序结果表明存在缺失37 bp的核酸片段;SDS-PAGE电泳显示在30.7 kDa处出现明显的蛋白条带;Dot blot结果表明1∶5 000稀释的多克隆抗体能检出12 ng GST-Z7;Western blot结果表明,1∶200稀释的多克隆抗体可识别HeLa细胞中Zwint-1 v7蛋白。结论:本研究在核酸水平和蛋白水平初步验证了HeLa细胞中存在Zwint-1 v7。

主 题 词：HeLa细胞 Zwint-1v7蛋白 原核表达 多克隆抗体制备 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-616x.2014.02.008

馆 藏 号：203119861...