TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒载体的构建及其在人脐带间质干细胞中的表达

作     者：周忠海 许文荣 朱伟 乔纯 王兴忠 陈圆 司煜安 徐静 周洪兴 张蕾蕾 李继刚 钱晖 ZHOU Zhong-hai;XU Wen-rong;ZHU Wei;QIAO Chun;WANG Xing-zhong;CHEN Yuan;SI Yu-an;XU Jing;ZHOU Hong-xing;ZHANG Lei-lei;LI Ji-gang;QIAN Hui

作者机构：江苏大学基础医学与医学技术学院 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30471938) 卫生部科研基金资助项目(WKJ2005-2-024) 江苏省自然科学基金重点项目(BK2007705) 江苏省自然科学基金项目(BK2007092) 江苏省医学领军人才资助项目(LJ200614) 镇江市重点实验室项目(2006066) 

出 版 物：《江苏大学学报（医学版）》 (Journal of Jiangsu University：Medicine Edition)

年 卷 期：2008年第18卷第3期

页      码：185-188,192,I0001页

摘      要：目的:构建携带绿色荧光蛋白的TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒表达载体,转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)。方法:设计含有GM-CSF信号肽序列和BglⅡ及HindⅢ酶切位点的引物,PCR扩增TNFα-Tumstatin,将扩增产物亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后转化含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组。筛选获得含有融合基因的重组腺病毒质粒,酶切鉴定并测序。重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,经过包装、扩增后感染hUCMSCs并检测细胞内融合基因的表达。结果:重组腺病毒质粒经PCR和PacⅠ酶切鉴定,证实含有TNFα-Tumstatin融合基因,测序结果和设计片段的序列一致。重组腺病毒感染的hUCMSCs表达绿色荧光蛋白和融合基因。结论:成功构建了TNFα-Tumstatin融合基因的腺病毒表达载体,能高效率感染hUCMSCs,为进一步研究融合基因修饰的hUCMSCs抗肿瘤效应奠定了基础。

主 题 词：腺病毒载体 融合基因 同源重组 细胞转染 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-7783.2008.03.001

馆 藏 号：203120420...