鸡堆型艾美耳球虫Rhomboid蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备和鉴定

作     者：黄艺华 冯俪 刘鹏 从培君 黄小丹 张瑞莉 杨贵君 李广兴 HUANG Yi-hua;FENG Li;LIU Peng;CONG Pei-jun;HUANG Xiao-dan;ZHANG Rui-li;YANG Gui-jun;LI Guang-xing;College of Veterinary Medicine,Northeast Agricultural University

作者机构：东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31172295 31272569) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2016年第46卷第4期

页      码：461-466页

摘      要：为了研究堆型艾美耳球虫Rhomboid蛋白的生物学功能及其作为潜在免疫抗原蛋白的可能性,根据Gen Bank上柔嫩艾美耳球虫Rhomboid基因序列(DQ323509.1)设计特异性引物,以堆型艾美耳球虫c DNA为模板PCR扩增包含Rhomboid基因ORF的片段。根据测序结果及抗原表位分析,设计表达区域特异性引物,PCR扩增后连接于p GEX-6P-1原核表达载体成功构建p GEX-Rhomboid表达质粒。将此质粒转入大肠杆菌Rosetta感受态细胞中进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析显示有36 ku的预期蛋白表达。蛋白纯化复性后免疫新西兰大白兔制备兔抗Rhomboid多克隆抗体。ELISA方法检测该多克隆抗体效价达到216,Western-blot及瞬时转染pc DNA-Rhomboid质粒表明,制备的多克隆抗体与堆型艾美耳球虫子孢子目的蛋白和真核质粒瞬时转染BHK21细胞表达蛋白均具有良好的反应性。本试验结果为进一步研究堆型艾美耳球虫Rhomboid蛋白的生物学活性奠定了基础。

主 题 词：堆型艾美耳球虫 Rhomboid蛋白 原核表达 多克隆抗体 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2016.04.010

馆 藏 号：203120742...