中蜂囊状幼虫病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立与应用

作     者：王艺桦 王红坤 周云倩 周丹银 张炫 WANG Yi-hua;WANG Hong-kun;ZHOU Yun-qian;ZHOU Dan-yin;ZHANG Xuan

作者机构：云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201 云南农业大学东方蜜蜂研究所云南昆明650201 云南省蜜蜂资源可持续利用工程研究中心云南昆明650201 

基　　金：国家自然科学基金项目(31560667) 国家现代蜂产业技术体系项目(CARS-44-kxj13) 云南省教育厅科学研究基金项目(2022Y269) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第53卷第5期

页      码：559-565页

摘      要：通过RT-PCR方法在云南中华蜜蜂体内检测中蜂囊状幼虫病毒(CSBV),该病毒主要以AmSBV-YN(GenBank ID:KX819276.1)病毒株的形式存在。为了精确鉴定、快速检测中蜂囊状幼虫病毒,根据AmSBV-YN的CDS保守区域,设计合成特异性引物并建立相对应的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的标准曲线循环域值(C_(t))与标准品模板浓度在2.34×10^(2)~2.34×10^(9)copies/μL间的线性关系良好,相关系数R~2为0.994,斜率为-3.118。该方法与蜜蜂残翅病毒、黑蜂王台病毒、蜜蜂以色列急性麻痹病毒不发生交叉反应,表明该方法特异性强;重复性评价结果显示,批内与批间的变异系数均小于3%。所建立的荧光定量PCR方法对中华蜜蜂样品的检测结果显示,阳性率达90.0%,高于常规PCR方法的检测阳性率73.3%,说明该方法具有良好的适用性。结果表明,该方法可应用于对中蜂囊状幼虫病毒的快速检测,为中蜂囊状幼虫病的及时防控提供了有力的技术支持。

主 题 词：中蜂囊状幼虫病毒 中华蜜蜂 AmSBV-YN SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR 

学科分类：0906[农学-水产类] 09[农学] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0096

馆 藏 号：203120982...