基于液相芯片技术建立快速检测6种临床常见血流感染厌氧菌的方法及评价

作     者：陈梅莲 曾见芬 张欣选 周文娟 余洁玲 彭兰芬 付文金 CHEN Mei-lian;ZENG Jian-fen;ZHANG Xin-xuan;ZHOU Wen-juan;YU Jie-ling;PENG Lan-fen;FU Wen-jin

作者机构：广东省东莞市厚街医院检验科广东东莞523945 东莞市南城社区卫生服务中心广东东莞523073 

基　　金：东莞市社会科技发展(一般)项目(202050715023529) 东莞市社会科技发展(重点)项目(202050715023181) 

出 版 物：《现代检验医学杂志》 (Journal of Modern Laboratory Medicine)

年 卷 期：2023年第38卷第2期

页      码：75-80,159页

摘      要：目的基于液相芯片技术建立一种可同时快速检测6种临床常见血流感染厌氧菌的方法。方法通过GenBank寻找脆弱拟杆菌、厌氧消化链球菌、具核梭杆菌、中间普雷沃菌、产气荚膜梭菌和痤疮丙酸杆菌的16S rDNA基因序列,经序列比对分析,选择菌内保守菌间特异的区域作靶序列,使用Primer 5.0软件设计特异性引物及探针,建立不对称多重PCR扩增体系,将PCR产物与偶联核酸探针的荧光微球混合物进行杂交,建立一种多重检测方法,并对该方法的特异度、灵敏度和重复性进行评价。收集2020年6月~2022年5月东莞市厚街医院阳性血厌氧培养瓶84例及阴性培养瓶16例,应用建立的方法进行检测,结果与传统培养法进行比较。结果6种厌氧菌靶基因序列经PCR扩增后,电泳成像清晰可见6条目标条带;经反应体系优化,生物素标记与非标记引物浓度比为4∶1时,选择退火温度56℃进行多重扩增,加入5μl PCR产物,52℃温育20 min检测效果最佳;各目标序列荧光强度中位值(median fluorescence intensity,MFI)>1000,无非特异性信号;最低检测限可达103cfu/ml~10^(4)cfu/ml;当菌液浓度为105cfu/ml时,批内及批间的变异系数分别在7.38%和11.10%以下;100例临床样本中6种厌氧菌的检测结果与培养法一致。结论成功建立一种快速、简便、高效的液相芯片方法,可同时检测6种常见血流感染厌氧菌。

主 题 词：厌氧菌 液相芯片 多重聚合酶链式反应 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-7414.2023.02.014

馆 藏 号：203120985...