柯萨奇病毒A组5型实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价

作     者：罗娟 田维霞 李永文 宋光敏 姚淼 陈佳丽 胡雨萌 刘娇阳 罗南宁 艾远航 吴凯峰 LUO Juan;TIAN Weixia;LI Yongwen;SONG Guangmin;YAO Miao;CHEN Jiali;HU Yumeng;LIU Jiaoyang;LUO Nanning;AI Yuanhang;WU Kaifeng

作者机构：遵义医科大学第三附属医院(遵义市第一人民医院)检验科/中心实验室贵州遵义563000 

基　　金：贵州省科学技术厅省市科技合作项目(省市科合38号) 贵州省教育厅创新群体研究项目(黔教合KY字019项目) 

出 版 物：《国际检验医学杂志》 (International Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2023年第44卷第7期

页      码：803-807页

摘      要：目的建立柯萨奇病毒A组5型(CVA5)特异的一步法实时荧光反转录聚合酶链反应(RT-PCR)核酸检测方法。方法以流行于遵义地区的CVA5病毒株和NCBI基因库中随机下载的CVA5 VP1基因序列作为参考序列,分析这些序列的保守区域,在其保守区设计特异性的引物与Taqman探针,建立检测CVA5的一步法实时荧光RT-PCR。通过构建含CVA5 VP1保守区域的重组质粒,绘制标准曲线,并对检测方法的灵敏度、特异性、重复性及临床样本检出限进行评价。利用该方法对遵义地区273份未明确分型的肠道病毒阳性样本进行检测,将检出的部分CVA5阳性产物进行测序。结果成功建立一种基于实时荧光RT-PCR的CVA5检测方法,该方法在10^(4)~10^(9)copy/mL范围内具有良好的线性关系(R 2>0.999),平均扩增效率为102.26%。灵敏度高,对临床样本的检出限为103copy/mL。该方法的特异性强,与柯萨奇病毒A组2型(CVA2)、柯萨奇病毒A组4型(CVA4)、柯萨奇病毒A组6型(CVA6)、丙型肝炎病毒、呼吸道合胞病毒和鼻病毒等均不发生交叉反应。重复性实验的变异系数低于1.5%。273份未明确分型肠道病毒阳性样本中共检出25份CVA5,占未明确分型阳性样本的9.16%。结论该研究建立的一步法CVA5RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于CVA5的检测。

主 题 词：柯萨奇病毒A5 实时荧光反转录聚合酶链反应 肠道病毒 手足口病 疱疹性咽峡炎 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-4130.2023.07.007

馆 藏 号：203120990...