甜瓜AMS基因结构分析及基因编辑载体构建

作     者：才羿 戴冬洋 谭海 王迪 杨芬 王岭 盛云燕 CAI Yi;DAI Dongyang;TAN Hai;WANG Di;YANG Fen;WANG Ling;SHENG Yunyan

作者机构：黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319 石河子大学新疆石河子832000 黑龙江省农业科学院大庆分院黑龙江大庆163310 

基　　金：国家自然科学基金“花药发育关键转录因子AMS调控甜瓜雄性不育机理研究”(31772330) 

出 版 物：《新疆农业科学》 (Xinjiang Agricultural Sciences)

年 卷 期：2023年第60卷第1期

页      码：61-68页

摘      要：【目的】研究鉴定甜瓜雄性不育候选基因ABORTED MICROSPORES(AMS)的基因家族,分析CRISPR基因编技术并构建其敲除载体,为甜瓜雄性不育基因AMS功能验证提供依据。【方法】采用生物信息学技术鉴定甜瓜雄性不育候选基因ABORTED MICROSPORES(AMS)家族基因,分析其进化关系、保守基序及理化性质。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术以甜瓜AMS基因外显子区设计gRNA引物,以载体pHSN401为模板,扩增获得sgRNA克隆框,使用Bsa I酶切pHSN401载体,利用DNA重组酶构建重组载体并转化农杆菌,挑选单克隆进行培养,随后进行菌液PCR鉴定。【结果】甜瓜AMS基因编码的蛋白质长度从501~605 aa不等,平均分子量约为59351 Da,等电点为5.04~6.45,甜瓜大部分AMS基因定位在细胞核;利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在AMS基因的CDS区设计3个靶位点,分别是AMS-pHSN401-1、AMS-pHSN401-2和AMS-pHSN401-3。【结论】AMS基因主要被预测在细胞核中表达,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建甜瓜敲除重组载体AMS-pHSN401并转化农杆菌,获得阳性克隆。

主 题 词：甜瓜 ABORTED MICROSPORES(AMS) 生物信息学 载体构建 

学科分类：09[农学] 0902[农学-自然保护与环境生态类] 090201[090201] 

D　O　I：10.6048/j.issn.1001-4330.2023.01.008

馆 藏 号：203120992...