非洲猪瘟病毒多重PMA-qPCR检测方法的建立及应用

作     者：卓玛 钱炳旭 吴晓东 戴建君 薛峰 ZHUO Ma;QIAN Bingxu;WU Xiaodong;DAI Jianjun;XUE Feng

作者机构：教育部动物卫生与食品安全国际联合研究实验室江苏南京210000 南京农业大学三亚学院海南三亚572000 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266000 

基　　金：国家重点研发计划(2021YFD1800500,2020YFA0910200) 海南省科技专项资金(ZDYF2022XDNY248) 江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(21)2038] 三亚市南京农业大学研究院指导基金项目(NAUSY-ZD08) 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第55卷第4期

页      码：93-101页

摘      要：本研究利用叠氮溴化丙锭(PMA)与多重荧光定量PCR(qPCR)技术相结合,建立了一种可以实现非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染性与非感染性(活/死病毒)鉴别的检测方法。通过对ASFV p72、CD2v、MGF110-14L基因保守序列设计特异性引物及探针,建立p72、CD2v、MGF110-14L基因的多重qPCR检测方法。结果显示,本研究建立的多重qPCR检测方法具有较强特异性,与其他常见猪病毒性原无交叉反应;同时,该方法具有较高灵敏度,p72、CD2v、MGF110-14L基因的重组质粒标准品最低检出限均为102copies/μL。为弥补qPCR技术不能有效区分样品中活/死病毒的缺陷,本研究将构建的多重qPCR与PMA技术相结合。当加入PMA终浓度为10μg/mL、暗孵育10 min、光照强度40 W、光照15 min时,PMA能够抑制灭活病毒基因的扩增且对活病毒基因的扩增无影响;对比普通qPCR与多重PMA-qPCR的灵敏度可知,两者的灵敏度均为102copies/μL;将多重PMA-qPCR方法用于23份实际样品检测,结果显示,检测活病毒的准确率为100%,说明该方法能有效区分临床样品中具有感染性的ASFV。

主 题 词：非洲猪瘟病毒 多重PMA-qPCR 基因缺失株 感染性病毒 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203121001...