HPV16阳性宫颈癌细胞株中miR-497-5p靶向PD-L1的免疫调控作用

作     者：王亚菲 杨英捷 孙清华 田琴 任婕 Wang Yafei;Yang Yingjie;Sun Qinghua;Tian Qin;Ren Jie

作者机构：贵阳市第二人民医院产科贵阳550081 贵州医科大学附属肿瘤医院妇科贵阳550000 贵州医科大学临床医学院贵阳550025 

基　　金：贵州省科技计划项目(编号:黔科合基础-ZK一般469) 

出 版 物：《肿瘤预防与治疗》 (Journal of Cancer Control And Treatment)

年 卷 期：2023年第36卷第3期

页      码：200-207页

摘      要：目的:探讨miR-497-5p靶向PD-L1在HPV16阳性宫颈癌细胞株中的免疫调控作用。方法:通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)验证宫颈癌细胞中HPV16 E6和E7蛋白对PD-L1蛋白是否有直接作用;对宫颈癌组织差异表达的miRNA进行生信分析筛查;以TCGA宫颈癌数据为基础,探讨miRNA与预后之间的关系;E6、E7 siRNA由上海吉玛制药技术有限公司设计合成,通过脂质体在HPV16阳性宫颈癌细胞株中转染E6、E7 siRNA,下调E6、E7的表达;构建E6、E7基因表达质粒,于HPV阴性子宫颈癌细胞株中表达E6、E7。利用qRT-PCR对不同组细胞表达miRNA进行检测;miR-497-5p mimics和inhibitor转染HPV16阳性宫颈癌细胞株,通过Western blot检测各组PD-L1蛋白的表达情况;通过预测软件,在PD-L1 mRNA 3’UTR上寻找miR-497-5p的作用靶点;利用双荧光素酶报告实验,验证miR-497-5p是否与PD-L1 mRNA 3’UTR靶向结合。结果:经Co-IP实验验证,HPV16 E6和E7对PD-L1无直接作用关系;在宫颈癌细胞中对E6和E7表达进行上调和下调后,发现E6、E7与hsa-miR-497-5p表达存在负调控关系;miR-497-5p mimics和inhibitor转染HPV16阳性宫颈癌细胞株后发现,hsa-miR-497-5p可抑制PD-L1蛋白的表达水平;hsa-miR-497-5p inbibitor可提高PD-L1蛋白的表达水平;双荧光素酶活性实验结果提示miR-497-5p可靶向结合PD-L1的3’-UTR序列。结论:HPV16 E6/E7可能通过miR-497-5P/PD-L1轴促进宫颈癌细胞免疫逃逸。

主 题 词：子宫颈鳞癌 微小RNA 程序性死亡受体配体-1 人乳头瘤病毒16 免疫调控 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-0904.2023.03.004

馆 藏 号：203121071...