虾肝肠胞虫实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作     者：张先东 付静静 刘伟琪 罗颖 邓桦 杨鸿 侯月娥 HE Gang;XU Jingen;HE Li;WU Bin;FANG Chunlin;YU Yali;FEI Chunping

作者机构：佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528000 珠海科艺普检测科技有限公司广东珠海519000 

基　　金：广东省高校科技服务乡村振兴重点领域专项(2021ZDZX4015) 

出 版 物：《水产学杂志》 (Chinese Journal of Fisheries)

年 卷 期：2023年第36卷第2期

页      码：8-13页

摘      要：近年来,虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)流行区域不断扩大,已经成为我国南美白对虾(Litopenaeus vannamei)养殖重要病原之一。本研究根据Gen Bank中虾肝肠胞虫18S r RNA保守区域设计一套特异性引物和荧光探针,通过优化反应条件,建立检测EHP的TaqMan探针实时荧光定量PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测方法。建立的方法呈良好的线性关系(R~2=0.998),灵敏度是巢式PCR的10倍。特异性试验表明:检测其他常见病原均为阴性,特异性好;重复性试验显示:批内批间变异系数均小于1.5%,重复性良好;对临床样品检测,与巢式PCR的符合率为97.81%。使用该方法对中山市、江门市和珠海市珠三角部分地区南美白对虾开展EHP流行病学调查,其中虾苗检出率为10.75%,成虾检出率为54.07%,部分区域检出率较高,要防范爆发风险。本研究建立的实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性和重复性良好,具有较好的应用前景。

主 题 词：南美白对虾 虾肝肠胞虫 实时荧光定量PCR 方法建立 应用 

学科分类：0906[农学-水产类] 09[农学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-3832.2023.02.002

馆 藏 号：203121085...