反刍动物埃立克体微滴数字PCR方法的建立及初步应用

作     者：王素华 王忠才 黄凌哲 吕继洲 吴绍强 赵治国 付海滨 韩小虎 张舟 WANG Su-hua;WANG Zhong-cai;HUANG Ling-zhe;LV Ji-zhou;WU Shao-qiang;ZHAO Zhi-guo;FU Hai-bin;HAN Xiao-hu;ZHANG Zhou

作者机构：温州海关综合技术服务中心浙江温州325027 中国检验检疫科学研究院动物检疫所北京100029 呼和浩特海关技术中心内蒙古呼和浩特010020 沈阳海关技术中心辽宁沈阳110067 沈阳农业大学动物科学与医学学院辽宁沈阳110161 

基　　金：浙江省重点研发计划项目(2021C02060) 海关总署科技计划项目(2020HK156) 中国检验检疫科学研究院基本科研业务费项目(2019JK022) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第45卷第1期

页      码：60-64页

摘      要：为建立反刍动物埃立克体(***)准确定量的微滴数字PCR方法(ddPCR),本研究以***-inantium pCS20基因为靶基因,选取保守区域设计引物和探针,建立了*** ddPCR方法。利用本研究建立的ddPCR方法检测***、牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、无形体、犬埃立克体、牛埃立克体、马埃立克体和立氏埃立克体等,结果显示仅***出现特异性扩增,而与其他寄生虫均无交叉反应,特异性强;将pUC57-pCS20重组质粒标准品10倍倍比稀释(1×10^(-1)拷贝/μL~1×10^(5)拷贝/μL)后,利用该ddPCR方法检测,结果显示,该方法对重组质粒标准品的检测限为1.8拷贝/μL,比相应荧光定量PCR方法的敏感性高10倍,本实验建立的ddPCR方法敏感性高;批内和批间重复性试验结果变异系数(CV)均小于2%,重复性好。利用建立的ddPCR方法对50只钝眼蜱样品检测,结果显示,阳性样品反刍动物埃立克体核酸的最低拷贝数为26拷贝/μL,ddPCR和荧光定量PCR检测试剂盒的检出率均为16.0%(8/50)。本研究首次建立的ddPCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,可作为***准确定量检测的有效手段。

主 题 词：反刍动物埃立克体 检测 pCS20基因 微滴数字PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.202203041

馆 藏 号：203121103...