酪氨酸激酶受体B基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

作     者：李梅 赵玉 井超 耿德勤 庄柏翔 樊红彬 LI Mei;ZHAO Yu;JING Chao;GENG De-qin;ZHUANG Bai-xiang;FAN Hong-bin

作者机构：南京医科大学教学示范中心南京210029 徐州医学院解剖学系 附属医院神经内科 

基　　金：基金项目:南京医科大学科技发展基金项目(2012NJMU005) 江苏省自然科学基金项目(SBK201221577) 

出 版 物：《中华行为医学与脑科学杂志》 (Chinese Journal of Behavioral Medicine and Brain Science)

年 卷 期：2013年第22卷第4期

页      码：370-373页

摘      要：目的构建有效抑制酪氨酸激酶受体B（TrkB）基因的RNA干扰慢病毒表达载体。方法根据大鼠TrkB基因的不同部位设计4对短发卡RNA（short hairpin RNA，shRNA）寡核苷酸片段，克隆到慢病毒干扎载体pXZRNAi1．0中，构建shRNA慢病毒表达载体pXZRNAi-shTrkB-1，2，3，4。获得较高滴度的慢病毒颗粒后感染大鼠神经干细胞，应用实时荧光PCR和Westernblot方法检测对TrkB的干扰效果。结果酶切鉴定和测序结果提示慢病毒载体的寡核苷酸链插入正确。包装浓缩慢病毒颗粒的滴度为8．6×105cfu／ml，对神经干细胞感染效率可达80％。与未感染组相比，转染pXZRNAi-shTrkB-3和4的神经干细胞中TrkBmRNA表达水平分别为（66．7±5．5）％和（76．8±4．9）％，TrkB蛋白的表达水平分别为（68．5±4．3）％和（78．2±5．1）％，均差异有统计学意义（p〈0．05）。结论成功构建可高效沉默TrkB基因的pXZRNAi-shTrkB慢病毒载体，为研究TrkB在神经干细胞中的作用提供了有力工具。

主 题 词：酪氨酸激酶受体B 慢病毒载体 RNA干扰 神经干细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 09[农学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1674-6554.2013.04.026

馆 藏 号：203121156...