靶向小鼠Tsc1和Tsc2基因的CRISPR/Cas9系统的构建及其打靶效力验证

作     者：杨玲玲 陈玲 李锦昆 王川贵 李勇 岳鹏鹏 于鸿浩 YANG Lingling;CHEN Ling;LI Jinkun;WANG Chuangui;LI Yong;YUE Pengpeng;YU Honghao

作者机构：桂林医学院智能医学与生物技术学院广西高校医药生物技术与转化医学重点实验室广西桂林541199 

基　　金：国家自然科学基金(31860302,32160147) 广西自然科学基金(2018JJA140455) 广西科技基地和人才专项(2019-AC20329) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2023年第36卷第4期

页      码：400-405页

摘      要：目的 设计并构建靶向Tsc1和Tsc2基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统,并在细胞水平验证基因编辑效力。方法针对小鼠Tsc1和Tsc2基因分别设计3个sgRNA导向序列,构建sgRNA表达载体,与Cas9表达质粒共转染小鼠N2a细胞,经药物筛选获得阳性细胞后,PCR扩增打靶位点的DNA片段,利用TA克隆测序验证打靶效率。结果 Tsc1基因Tsc1-M-sgRNA2、Tsc1-M-sgRNA3及Tsc2基因Tsc2-M-sgRNA1、Tsc2-M-sgRNA2、Tsc2-M-sgRNA3这5个靶点均发生基因编辑,编辑效率分别为40%、80%、30%、30%和20%。结论 成功构建了有编辑效力的靶向小鼠Tsc1和Tsc2基因的CRISPR-Cas9基因编辑系统。

主 题 词：CRISPR/Cas9系统 基因编辑 结节性硬化症 Tsc1 Tsc2 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.003875

馆 藏 号：203121203...