利用CRISPRi下调 MDR1基因表达增强肺腺癌 A549/DDP细胞对顺铂敏感性

作     者：刘凯 孙新迪 张伟伟 杨清竹 黄鑫 邵淑丽 LIU Kai;SUN Xin-di;ZHANG Wei-wei;YANG Qing-zhu;HUANG Xin;SHAO Shu-li

作者机构：齐齐哈尔大学生命科学与农林学院黑龙江齐齐哈尔161006 抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑龙江省重点实验室黑龙江齐齐哈尔161006 

基　　金：国家自然科学基金项目(31670843) 黑龙江省教育厅基本业务专项重点项目(135109104) 黑龙江省教育厅基本业务专项(粮头食尾)(LTSW201737) 黑龙江省省属高等学校基本科研业务费科研项目(植物性食品加工技术特色学科专项,YSTSXK201809) 齐齐哈尔大学2021年研究生创新科研项目(YJSCX2021029) 

出 版 物：《中国应用生理学杂志》 (Chinese Journal of Applied Physiology)

年 卷 期：2022年第38卷第5期

页      码：590-594页

摘      要：目的:探讨利用CRISPRi下调MDR1基因表达增强肺腺癌A549/DDP细胞对顺铂敏感性的作用。方法:利用生物信息学技术预测MDR1基因启动子上潜在的CRISPRi干扰位点,设计干扰片段并构建重组载体,采用qRT-PCR、Western blot方法检测各组细胞中MDR1基因mRNA以及蛋白表达水平,筛选干扰效率高的重组载体进行后续实验。将人肺癌A549/DDP细胞分为3组,分别为A549/DDP、Scrambed、sgRNA-MDR1-1,每组设置3个复孔。将各载体转染细胞48 h后,流式细胞术检测各组细胞外排情况,MTT法检测各组细胞的IC 50值,激光共聚焦显微镜下观察各组细胞经顺铂处理后的细胞形态。结果:经测序比对,成功构建两种干扰MDR1基因转录的CRISPRi重组载体。转染A549/DDP细胞后,各转染组细胞MDR1基因mRNA以及蛋白水平均显著降低(P<0.01),其中sgRNA-MDR1-1的干扰效率最高,mRNA和蛋白水平干扰效率分别达60%和51%。与Scrambed组相比,转染sgRNA-MDR1-1组细胞的细胞外排能力降低(P<0.01),细胞对顺铂的IC 50值显著降低(P<0.01),细胞内染色质聚集边缘化。结论:利用CRISPRi技术干扰MDR1基因表达能增强肺腺癌A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

主 题 词：CRISPRi MDR1基因 药物敏感性 肺腺癌A549/DDP细胞 细胞培养 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071009[071009] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.12047/j.cjap.6342.2022.109

馆 藏 号：203121246...