黄颡鱼小RNA病毒qPCR检测方法的建立与应用

作     者：穆雪姣 潘晓艺 周可欣 蔺凌云 姚嘉赟 沈锦玉 MU Xuejiao;PAN Xiaoyi;ZHOU Kexing;LIN Lingyun;YAO Jiayun;SHEN Jinyu

作者机构：浙江海洋大学舟山316022 浙江省淡水水产研究所、农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室、浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州313001 

基　　金：湖州市乡村振兴项目(项目号:2020ZD2033) 题目:黄颡鱼暴发病病原及其净化技术集成与示范 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2023年第39卷第4期

页      码：1062-1071页

摘      要：黄颡鱼小RNA病毒(Yellow catfish Picornavirus,YCPrV)是黄颡鱼重要的致死性病原,本研究旨在建立一种快速、精准的YCPrV检测方法。基于YCPrV 22426⁃8毒株RdRp基因编码区序列设计特异性引物和探针,通过质粒标准品和标准曲线的制作,反应体系和反应条件的优化,灵敏度和特异性的测试,建立一种检测YCPrV的TaqMan荧光定量PCR(qPCR)方法。结果显示,在绘制的qPCR标准曲线中,拷贝数与Ct值具有良好的线性关系,相关系数(R^(2))为0.9974,扩增效率为88.98%,最高检测灵敏度为5.09×10^(0)拷贝。该方法对来自黄颡鱼、鲫鱼、鲤鱼和虾的其它8种病毒无扩增信号,仅YCPrV具有扩增曲线,对临床样品阳性检出率比普通PCR高12.28%。自然感染黄颡鱼组织中YCPrV检测结果发现,病毒载量从高到低依次为肠、肾、心、肝、脾、鳃和脑。以上结果表明,本研究建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏度和可重复性,临床检测YCPrV时,建议优选肾和心作为检测靶标组织。YCPrV qPCR方法的建立,可为YCPrV的精准定量检测和疾病早期预防提供有利手段。

主 题 词：黄颡鱼 小RNA病毒 病毒性出血病 TaqMan荧光定量PCR 

学科分类：0906[农学-水产类] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004316

馆 藏 号：203121250...