中药材茯苓PCR鉴定与特征

作     者：兰春阳 李翔 李佩瑶 孟雪 冯新源 李明成 LAN Chun-yang;LI Xiang;LI Pei-yao;MENG Xue;FENG Xin-yuan;LI Ming-cheng

作者机构：北华大学医学技术学院吉林132013 吉林省中药DNA指纹检测技术科技创新中心吉林132013 

基　　金：吉林省科技创新中心建设项目(No.20190902018TC) 吉林省科技厅科技创新项目(No.20190304101YY,No.YDZJ202102CXJD061) 

出 版 物：《药物分析杂志》 (Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis)

年 卷 期：2023年第43卷第3期

页      码：414-421页

摘      要：目的:建立针对真菌类中药材茯苓的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)鉴定技术,从分子生物学角度出发,对茯苓的真伪进行鉴定。方法:对经典十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法进行改良,提取样品基因组DNA,以茯苓内转录间隔区(internal transcribed space, ITS)为目的序列,设计特异性引物,优化PCR反应体系,建立茯苓PCR鉴定方法,同时克隆特异性扩增的目的条带,测序鉴定其准确性,最后进行方法学验证。结果:提取的基因组DNA浓度较高、纯度较好、完整度良好。琼脂糖凝胶电泳结果表明正品茯苓可以在199 bp处出现单一明亮的特异性扩增条带,而伪品不出现扩增条带,引物的特异性为100%,克隆后的目的片段电泳图谱清晰明亮,克隆片段与Genbank数据库中已登记的茯苓物种序列相似性高达100%。在操作人员不知样品真伪的情况对样本检测,目标条带出现位置与预期一致;灵敏度检测结果表明,DNA检测下限可达1 ng·μL^(-1);挑选3位实验室人员进行茯苓真伪检测,结果相同且和预期一致,建立的茯苓PCR鉴定方法特异性良好,准确性高,重复性好。结论:PCR鉴定技术为茯苓的真伪鉴别提供了简便可靠、特异性良好,并且准确性高的鉴别方法。采用分子克隆技术可以成功保存茯苓标准对照品,测序结果准确可靠。

主 题 词：茯苓 内转录间隔区 聚合酶链式反应方法 改良十六烷基三甲基溴化铵 分子生物学鉴定 

学科分类：1007[医学-药学类] 100704[100704] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.16155/j.0254-1793.2023.03.07

馆 藏 号：203121257...