环介导逆转录等温扩增技术检测中东呼吸综合征冠状病毒基因

作     者：关丽 聂凯 张丹 李鑫娜 王延群 谭文杰 马学军 GUAN Li;NIE Kai;ZHANG Dan;LI Xinna;WANG Yanqun;TAN Wenjie;MA Xuejun

作者机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 广州医科大学基础医学院广州511436 

基　　金：传染病重大专项(2013ZX10004-001 2012ZX10004-215 2013ZX10004-202和2013ZX10004804-007) 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2015年第31卷第3期

页      码：269-275页

摘      要：建立了基于浊度仪和羟基萘酚蓝(Hydroxy naphthol blue,HNB)颜色变化的简单、快速和灵敏的环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)检测方法,应用于中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)的检测。针对MERS-CoV的核衣壳蛋白基因(Nucleocapsid,N)设计6条特异引物,在等温条件下(63℃)进行60min扩增反应。通过实时浊度仪记录扩增曲线和扩增前在反应体系中加入HNB观察颜色变化两种方式进行检测结果判定。本文对不同人类冠状病毒及常见呼吸道病毒进行了特异性验证,对梯度稀释的体外转录MERS-CoV全N基因RNA进行了定量和检测限分析,同时与已发表的实时荧光定量PCR(rRT-PCR)进行比较。结果显示,本研究建立的RT-LAMP方法特异性高,对于每反应管103至106的拷贝数RNA,出峰时间与每反应管N基因RNA拷贝数对数值有稳定的线性关系。基于浊度仪和颜色判定的RT-LAMP检测方法检测限分别为500拷贝和1 000拷贝。因此,该方法有望应用于MERS-CoV感染的快速筛选,具有在基层医疗卫生机构和现场推广和应用的潜力。

主 题 词：环介导逆转录等温扩增 中东呼吸综合征冠状病毒 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.002695

馆 藏 号：203121261...