流产布鲁氏菌1型Bb1-PCR检测方法的建立

作     者：崔光亚 刘瑞 邴啟政 曾巧英 田莉莉 范伟兴 CUI Guang-ya;LIU Rui;BING Qi-zheng;ZENG Qiao-ying;TIAN Li-li;FAN Wei-xing

作者机构：甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 

基　　金：国家自然科学基金项目(30960284) 甘肃农业大学伏羲杰出人才项目 现代农业(奶牛)产业技术体系专项经费项目(CARS-37) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2014年第44卷第7期

页      码：725-729页

摘      要：根据GenBank中已登录序列,针对流产布鲁氏菌1型特异的保守序列设计了1对引物,通过对反应体系及条件的优化,建立了一种可以快速鉴别流产布鲁氏菌1型的Bb1-PCR方法,并验证了其特异性和敏感性。应用该方法对牦牛流产胎盘组织的临床检样进行诊断,验证其临床适用性和准确性。结果显示,Bb1-PCR(25μL)的最佳扩增条件为:退火温度68.5℃,引物浓度15pmol/μL,Premix Taq12.5μL,35次循环。在该条件下,仅流产布鲁氏菌1型标准菌株(*** 2308)扩增出784bp的目的条带,而马耳他布鲁氏菌,绵羊附睾种布鲁氏菌,猪种布鲁氏菌,犬种布鲁氏菌,沙林鼠种布鲁氏菌,流产布鲁氏菌2~6、9型,大肠杆菌O157:H7和耶尔森菌O:91均无条带出现。敏感性为1CFU/mL。用建立的Bb1-PCR方法能直接从流产胎盘检样中检测流产布鲁氏菌1型,其诊断结果和细菌学表型鉴定结果完全一致。本研究建立的Bb1-PCR方法能够准确检测流产布鲁氏菌1型,其高度特异、敏感、可靠、稳定,适用于布鲁氏菌病的流行病学快速诊断。

主 题 词：布鲁氏菌病 流产布鲁氏菌1型 Bb1-PCR方法 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2014.07.008

馆 藏 号：203121342...