食品中沙门氏菌活菌的Taq Man实时荧光PCR检测方法研究

作     者：黎财慧 游淑珠 王小玉 姚丽锋 丁琦 冯家望 LI Cai-Hui;YOU Shu-Zhu;WANG Xiao-Yu;YAO Li-Feng;DING Qi;FENG Jia-Wang

作者机构：拱北海关技术中心珠海519015 

基　　金：珠海市社会发展领域科技计划重点项目(ZH22036201210211PWC) 拱北海关科技计划项目(2021GK011) 

出 版 物：《中国口岸科学技术》 (China Port Science and Technology)

年 卷 期：2023年第5卷第4期

页      码：76-83页

摘      要：利用沙门氏菌fim Y基因设计特异性引物、探针,优化叠氮溴化丙锭(propidium azide bromide,PMA)染料浓度及相关反应条件,使用高亮度蓝色发光二极管(Light Emitting Diode,LED)光解仪代替卤素光源,建立了食品中沙门氏菌活菌的Taq Man实时荧光PCR快速检测方法。实验表明,设计的引物、探针特异性强,能特异性扩增7株沙门氏菌,其他非沙门氏菌均无扩增,对沙门氏菌纯培养物检测灵敏度可达102 CFU/m L。经反应条件优化后,在PMA浓度为20μmol/L,暗反应5 min,曝光反应10 min条件下,对106 CFU/m L的沙门氏菌热致死菌抑制效果最好,活菌的扩增不受影响。利用优化的PMA处理方法结合Taq Man实时荧光PCR和不经PMA处理的Taq Man实时荧光PCR,分别检测3种不同浓度(5 CFU/25 g、50 CFU/25 g、500 CFU/25 g)活菌和高浓度死菌(106 CFU/25 g)的沙门氏菌人工混合污染样品,以及仅高浓度沙门氏菌死菌污染的人工污染样品。结果显示,2种方法检测沙门氏菌活菌和沙门氏菌死菌的人工混合污染样品的结果均为阳性,只添加沙门氏菌死菌的人工污染样品PMA处理组扩增结果为阴性、不经PMA处理对照组为阳性,表明优化后的PMA处理方法排除了沙门氏菌死菌对Taq Man实时荧光PCR假阳性的影响,并可以有效检出食品样品中的沙门氏菌活菌。食品样品增菌后的沙门氏菌活菌检测过程只需4~5 h,本研究为食品中沙门氏菌活菌的快速检测提供了一种科学有效的方法。

主 题 词：沙门氏菌 活菌 叠氮溴化丙锭(PMA) TaqMan实时荧光PCR 

学科分类：081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 09[农学] 0903[农学-动物生产类] 070302[070302] 0703[理学-化学类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-4689.2023.04.013

馆 藏 号：203121527...