高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

作     者：王雪平 张孝俊 李晓月 王国栋 张福良 宋玉伟 张明亮 马磊 WANG Xueping;ZHANG Xiaojun;LI Xiaoyue;WANG Guodong;ZHANG Fuliang;SONG Yuwei;ZHANG Mingliang;MA Lei

作者机构：安阳工学院河南省兽用生物制品研究与应用国际联合实验室安阳455000 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(NSFC32002313) 河南省高等学校重点科研项目(20B230001) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第50卷第5期

页      码：2053-2060页

摘      要：【目的】原核表达禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)Hexon蛋白,并制备兔抗Hexon多克隆抗体,为FAdV-4 Hexon功能研究提供材料。【方法】采用基于PCR的长DNA序列准确合成(PCR-based accurate synthesis,PSA)方法,设计全长拼接引物,在引物两端各设计保护性碱基合成FAdV-4 Hexon基因;利用同源重组技术将其连接至pCzn1-Hexon表达载体,获得pCzn1-Hexon重组质粒进行原核表达,采用纯化重组蛋白免疫新西兰白兔制备兔抗Hexon蛋白的多克隆抗体。以间接ELISA方法测定多克隆抗体效价;通过Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定多克隆抗体的特异性。【结果】重组原核表达质粒pCzn1-Hexon经双酶切及测序鉴定证明构建正确;获得的重组蛋白以包涵体的形式表达,分子质量约为41 ku;用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔后,通过间接ELISA方法检测抗体效价高达1∶512000。以制备的多克隆抗体为一抗,通过Western blotting和IFA检测到鸡肝癌细胞(LMH)中的Hexon蛋白表达,表明制备的多克隆抗体能与Hexon蛋白发生特异性反应。【结论】FAdV-4 Hexon蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,制备并纯化的抗Hexon多克隆抗体具有较高的反应性和特异性,该研究为进一步探究Hexon蛋白的生物学功能及其在FAdV-4感染和致病过程中的作用奠定了基础。

主 题 词：禽腺病毒4型 Hexon蛋白 原核表达 多克隆抗体 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.05.032

馆 藏 号：203121633...