布鲁氏菌S2疫苗株实时荧光定量PCR检测体系的建立及应用

作     者：田国忠 刘波 国原源 苏丽琴 张必科 Tian Guozhong;Liu Bo;Guo Yuanyuan;Su Liqin;Zhang Bike

作者机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206 中国疾病预防控制中心实验室管理处北京102206 中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所北京100050 

基　　金：国家重点研发计划项目(2021YFC2600501) 国家重点研发计划项目(2017YFC1602004) 

出 版 物：《中华地方病学杂志》 (Chinese Journal of Endemiology)

年 卷 期：2023年第42卷第4期

页      码：328-331页

摘      要：目的建立一种布鲁氏菌S2疫苗株的实时荧光定量PCR检测体系。方法依据布鲁氏菌S2疫苗株与其他布鲁氏菌参考菌株全基因组序列的差异,设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测体系。自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,收集22株布鲁氏菌参考菌株及8种非布鲁氏菌对照菌株的DNA;同时自布病疫苗生产厂采集环境样本,使用血液/组织基因组DNA提取试剂盒提取环境样本细菌DNA。对获取的DNA先行普通PCR预扩增,再以扩增的PCR产物为模板进行实时荧光定量PCR二次扩增(巢式荧光定量PCR),观察是否出现特异荧光曲线及相应的循环数(Ct值),并测试其灵敏性。结果建立的实时荧光定量PCR检测体系,除S2疫苗株外,其他21株布鲁氏菌参考菌株和8种非布鲁氏菌对照菌株均未检出特异荧光曲线(无Ct值)。建立的检测体系,检测布鲁氏菌S2疫苗株DNA的最低限为4.34 fg;采集的14份环境样本,其中3份检测到布鲁氏菌S2疫苗株DNA。结论建立的实时荧光定量PCR检测体系,能够检测到样本中布鲁氏菌S2疫苗株,具有较好的灵敏性和特异性。

主 题 词：布鲁氏菌 S2疫苗株 实时荧光定量PCR 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.cn231583-20220331-00102

馆 藏 号：203121800...