丙型肝炎病毒NS3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

作     者：孙涛 杨光文 张金阳 夏雪山 Tao Sun;Guangwen Yang;Jinyang Zhang;Xueshan Xia

作者机构：昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500 云南省分子医学研究中心云南昆明650500 

基　　金：国家自然科学基金(No.81260248) 国家科技支撑计划项目(No.2014BAI01B01) 云南省应用基础研究计划(No.KKS0201326002) 昆明理工大学人才培养基金(No.KKSY201326085) 云南省科技创新平台建设计划(No.2012DA002)资助~~ 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2015年第31卷第5期

页      码：711-721页

摘      要：提高对丙型肝炎患者实验室检测的灵敏度和特异性,对相关人群进行筛查和早期诊断,是控制丙型肝炎病毒(HCV)流行与传播的有效措施。为了建立更为可靠的HCV诊断方法,通过采用PCR方法从J6/JFH12a型病毒中克隆出HCV ns3基因片段,将其连接到p ET-28a载体上,重组载体p ET-28a-ns3转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达,以10%SDS-PAGE进行鉴定,获得表达的NS3重组蛋白分子量为72 k Da。将纯化的NS3蛋白免疫BALB/c小鼠,第4次免疫后采集血液并分离血清进行抗体活性鉴定,小鼠抗体效价为1∶256 000。进一步的Western blotting和间接免疫荧光结果显示,以重组NS3蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体可以很好地识别HCV感染Huh7.5.1细胞中的NS3蛋白,为下一步开展单克隆抗体制备和检测试剂盒研制工作奠定了基础。

主 题 词：丙型肝炎病毒 B细胞表位 NS3蛋白 多克隆抗体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 0836[0836] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13345/j.cjb.140447

馆 藏 号：203121843...