运用重叠PCR技术构建HCV全长cDNA细胞培养适应性突变体

作     者：孙梦宁 薛小平 尹文 吕欣 雷迎峰 韦三华 胡兴斌 杨敬 SUN Meng-ning;XUE Xiao-ping;YIN Wen;L(U) Xin;LEI Ying-feng;WEI San-hua;HU Xing-bin;YANG Jing

作者机构：第四军医大学微生物学教研室陕西西安710032 

基　　金：国家自然科学基金项目(30371280) 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2006年第17卷第1期

页      码：27-30页

摘      要：目的:构建含有不同组合细胞培养适应性突变的丙型肝炎病毒(HCV)全长基因组cDNA。方法:根据HCV全长基因组cDNA序列及突变位点设计引物,运用重叠延伸PCR法对ns3和ns5a基因的E1202G、T1280I和S2197P位点进行细胞培养适应性突变,将突变后的片段分别克隆入pBluescriptIIKS(+)、pRSET-A载体,经测序正确后,分别连入含有HCV全长cDNA的质粒的H/FL相应位置,置换原未突变片段,并进行PCR及酶切鉴定。结果:经PCR、酶切和DNA序列测定证实,预期位点发生突变,而其他序列未发生随机突变。结论:构建了含有不同组合细胞培养适应性突变的HCV全长基因组cDNA突变体,为HCV在细胞内复制机制的研究和可稳定复制、表达的HCV体外培养体系的研究奠定了基础。

主 题 词：丙型肝炎病毒 重叠延伸PCR 定点突变 细胞培养 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 071010[071010] 100705[100705] 081704[081704] 07[理学] 1001[医学-基础医学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2006.01.009

馆 藏 号：203121854...