副溶血弧菌与嗜水气单胞菌双重PCR检测方法的建立

作     者：许佳乐 陈忠伟 陈婷婷 许艺兰 全琛宇 卢冰霞 林森 梁盼 曾家家 江新华 秦毅斌 黄广杰 何颖 欧阳康 Xu Jiale;Chen Zhongwei;Chen Tingting;Xu Yilan;Quan Chenyu;Lu Bingxia;Lin Sen;Liang Pan;Zeng Jiajia;Jiang Xinhua;Qin Yibin;Huang Guangjie;He Ying;Ouyang Kang

作者机构：广西大学动物科学技术学院动物传染病与分子免疫学实验室广西南宁530005 广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西南宁530001 广西壮族自治区贵港市水产技术推广站广西贵港537100 广西壮族自治区玉林市水产技术推广站广西玉林537000 

基　　金：广西重点研发计划项目(桂科AB21076008,桂科AB20297059) 贵港市科学研究与技术开发计划项目(贵科计2117005) 玉林市科学研究与技术开发计划项目(玉市科20220519) 广西农业科技自筹经费项目(Z202226,Z202224) 广西基本科研业务费(桂科专项21-4) 

出 版 物：《中国动物检疫》 (China Animal Health Inspection)

年 卷 期：2023年第40卷第5期

页      码：102-106,120页

摘      要：为建立一种可精准、快捷鉴别检测副溶血弧菌(VP)及嗜水气单胞菌(AH)的方法,根据GenBank公布的VP Tlh基因及AH aerA基因保守区序列,设计合成两对特异性引物,通过优化反应体系及反应程序,成功建立了一种可同时检测VP与AH的双重PCR方法,并开展了特异性及敏感性试验。结果显示:VP Tlh和AH aerA基因扩增条带大小分别为500、760 bp;反应体系中Tlh与aerA基因引物最优浓度分别为7.5、10.0 nmol/L,反应程序中最佳退火温度为56.8℃;该方法对VP、AH的最低可检出细菌浓度均为1.2×10^(3)CFU/mL;对地衣芽孢杆菌、微小杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡阳芽孢杆菌、普通变形杆菌、维氏气单胞菌、布氏柠檬酸杆菌、豚鼠气单胞菌、霍乱弧菌、拟态弧菌、简氏气单胞菌等其他非目标菌均无交叉反应,仅对VP和AH呈特异性阳性扩增。综上,本研究建立了一种可快速鉴别诊断VP、AH的双重PCR检测方法,其特异性强、灵敏度高,可为VP、AH等细菌性病原引发的水生动物疫病的快速诊断、监测及有效防控提供技术支持。

主 题 词：双重PCR 副溶血弧菌 嗜水气单胞菌 Tlh基因 aerA基因 快速诊断 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-944X.2023.05.019

馆 藏 号：203122133...