过表达肌球蛋白磷酸酶靶亚基1对前列腺癌细胞迁移侵袭能力的影响

作     者：邹志豪 刘仁 周瑞 梁应科 卢剑铭 钟惟德 梁宇翔 Zou Zhihao;Liu Ren;Zhou Rui;Liang Yingke;Lu Jianming;Zhong Weide;Liang Yuxiang

作者机构：澳门科技大学中药质量研究国家重点实验室中国澳门999078 广州实验室广州510005 广州市第一人民医院华南理工大学附属第二医院泌尿外科广州510180 

基　　金：澳门特别行政区科学技术发展基金(0031/2021/A、0090/2022/A) 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2023年第40卷第4期

页      码：696-699页

摘      要：目的探讨前列腺癌细胞内肌球蛋白磷酸酶靶亚基1(MYPT1)的表达变化及其对侵袭转移能力的影响。方法设计合成过表达MYPT1基因的慢病毒质粒(pLenti6.3-MYPT1),转染前列腺癌PC3及DU145细胞48 h,设定对照组(转染对照pLenti6.3-Ctrl)和过表达组(转染pLenti6.3-MYPT1);采用细胞划痕和Transwell实验检测24 h及48 h细胞迁移和侵袭能力;免疫荧光(IF)染色检测细胞骨架变化;蛋白质印迹法(Western blot)和定量聚合酶链式反应(qPCR)检测细胞株(PC3、DU145)转染后MYPT1和上皮-间充质转化(EMT)相关分子标志物:N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、锌指结构蛋白(Snail)和E盒结合锌指蛋白1(ZEB-1)的mRNA及蛋白相对表达水平。组间统计分析采用独立样本t检验。结果转染pLenti6.3-MYPT1后,PC3和DU145细胞内MYPT1相对表达水平明显上调,差有统计学意义(Western blot:0.834±0.055、0.849±0.044比0.487±0.026、0.526±0.045,t=8.098,7.212,P<0.01;qPCR:3.134±0.280、2.091±0.099比0.967±0.034、1.019±0.150,t=10.860,8.449,P<0.01)。细胞划痕和Transwell实验显示转染过表达质粒后细胞迁移(t=8.342,6.776,P<0.01)和侵袭(t=11.670,11.870,P<0.001)能力明显减弱。免疫荧光染色表明,与对照组比较,过表达MYPT1的细胞表面变光滑,丝状伪足和片状伪足减少,F-肌动蛋白(F-actin)从细胞质富集到细胞膜,着色变浅。两细胞株过表达组N-cadherin、MMP-2、MMP-9、Snail、ZEB-1显著低于对照组(P<0.05)。结论过表达MYPT1能抑制前列腺癌细胞的迁移侵袭能力,其作用机制可能与细胞骨架重构及EMT相关。

主 题 词：肌球蛋白磷酸酶靶亚基1 前列腺癌 细胞骨架 上皮-间充质转化 迁移 侵袭 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.cn421213-20220914-01294

馆 藏 号：203122137...