利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创建水稻OsPUX2突变体

作     者：高上 满淼淼 赵华 张丽娜 王加峰 GAO Shang;MAN Miao-miao;ZHAO Hua

作者机构：华南农业大学国家植物航天育种工程技术研究中心广东广州510642 广州国家现代农业产业科技创新中心广东广州510520 

基　　金：2021年省级乡村振兴战略专项经费(2021KJ382) 农业农村部华南现代生物种业重点实验室(2105-000000-20-03-457451) 

出 版 物：《安徽农业科学》 (Journal of Anhui Agricultural Sciences)

年 卷 期：2023年第51卷第9期

页      码：73-76页

摘      要：[目的]U-box蛋白是一类决定靶标蛋白特异性的E3泛素连接酶(少部分属于泛素链聚集因子-E4),在植物抗病、抗逆和生长发育各阶段都发挥着重要作用。为揭示U-box蛋白家族基因OsPUX2在水稻防御反应中的具体生物学功能,利用CRISPR/Cas9编辑技术对OsPUX2基因进行编辑。[方法]在OsPUX2第1外显子设计1个20 bp的编辑靶点,构建了OsPUX2基因敲除载体pRGEB32-OsPUX2-gRNA载体,并通过农杆菌介导的转化方法侵染水稻Pik-H4 NIL愈伤组织,经潮霉素检测获得转基因阳性植株,并对T 0代转基因植株进行靶点区域序列进行PCR和测序分析,分析ospux2的突变类型。[结果]成功获得了ospux2的敲除突变体材料,对突变类型的分析发现,转基因编辑后代共存在7种突变类型,以缺失突变为主,其中一种纯合突变类型在OsPUX2第一个外显子的第115号碱基处缺失了一个C碱基,导致蛋白的翻译在第84个氨基酸处提前终止。[结论]该研究获得ospux2突变株系对进一步研究该基因的功能具有重要意义。

主 题 词：水稻 U-box OsPUX2 CRISPR/Cas9 基因编辑 

学科分类：09[农学] 0901[农学-植物生产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.09.018

馆 藏 号：203122141...