乙型脑炎病毒结构蛋白PrM单克隆抗体的制备和分析

作     者：陈梦莉 谢丰玉 张彤 郑家杨 魏建超 李宗杰 李蓓蓓 邱亚峰 马志永 邵东华 刘珂 冯秀丽 CHEN Mengli;XIE Fengyu;ZHANG Tong;ZHENG Jiayang;WEI Jianchao;LI Zongjie;LI Beibei;QIU Yafeng;MA Zhiyong;SHAO Donghua;LIU Ke;FENG Xiuli

作者机构：南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 

基　　金：上海市自然科学基金面上项目(21ZR1477100) 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第55卷第6期

页      码：76-81页

摘      要：为了制备乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)结构蛋白PrM单克隆抗体,首先根据NCBI参考序列(GQ918133.2)设计PrM引物扩增目的基因,将目的基因构建至pColdⅠ原核表达质粒上;然后鉴定阳性克隆质粒并转化至BL21(DE3)感受态细胞,经诱导表达蛋白纯化后。免疫6周龄BALB/c小鼠,进行杂交瘤细胞融合,并对融合细胞进行克隆筛选;最后将筛选阳性的杂交瘤细胞制备腹水获取单克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体效价,Western blot和间接免疫荧光检测抗体特异性和病毒感染过程。结果显示:成功构建了pCold I-PrM原核表达载体,PrM蛋白在1 mmol/L IPTG 16℃过夜诱导培养时表达量较高,亚克隆后经腹水制备获得2株针对PrM区域的单克隆抗体,Western blot和间接免疫荧光检测2株单抗能够特异性识别JEV的PrM区蛋白,获得的单抗能够鉴定JEV在细胞内的感染过程。本研究为进一步研究JEV鉴别诊断技术和生物学功能提供基础。

主 题 词：日本乙型脑炎病毒 PrM/M 单克隆抗体 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203122153...