检测orfA基因拷贝数鉴定布鲁氏菌种型的实时荧光定量PCR方法研究

作     者：田国忠 Tian Guozhong

作者机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206 

基　　金：国家重点研发计划项目(2021YFC2600501) 

出 版 物：《中华地方病学杂志》 (Chinese Journal of Endemiology)

年 卷 期：2023年第42卷第5期

页      码：409-413页

摘      要：目的建立实时荧光定量PCR方法检测布鲁氏菌基因组内IS711转座酶基因(orfA基因)的拷贝数,并应用于布鲁氏菌种与生物型的鉴定。方法构建基于Taqman探针法实时荧光定量PCR技术的orfA基因拷贝数的检测体系。设计bcsp31基因和orfA基因的引物和探针,应用实时荧光定量PCR方法同时检测同一菌株相同DNA浓度下的bcsp31基因和orfA基因含量,获得2个基因的循环数(CT值),再根据bcsp31基因和orfA基因CT值的差异,换算出待检测布鲁氏菌菌株基因组内orfA基因的拷贝数。同时,将布鲁氏菌16M菌株DNA进行2倍递减稀释,验证检测体系的稳定性。结果当16M菌株DNA浓度相差2倍时,实时荧光定量PCR方法同时检测bcsp31基因和orfA基因,测得的CT值差值均值均为1.00,95%置信区间为0.95~1.05,标准差为0.17,变异系数为0.17。应用该检测体系检测30株布鲁氏菌菌株DNA中orfA基因的拷贝数,发现羊种生物1~3型菌株分别有6、9和7个拷贝数;猪种生物2型菌株有10个拷贝数,与其他4个猪种生物型(1、3~5)菌株拷贝数不同;绵羊附睾种菌株有37个拷贝数;8个牛种生物型(1~7、9)菌株拷贝数稳定在5~6个。结论成功建立了一种检测布鲁氏菌orfA基因拷贝数的实时荧光定量PCR方法,该方法能够鉴定部分布鲁氏菌种与生物型菌株。

主 题 词：布鲁杆菌属 orfA基因 拷贝数 实时荧光定量PCR 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.cn231583-20220315-00079

馆 藏 号：203122266...