酿脓链球菌特异、快速分子检测方法的建立

作     者：王玉贤 王莉芝 唐雪 赵怡环 李秉成 黄维藻 雍彬 陶向 WANG Yuxian;WANG Lizhi;TANG Xue;ZHAO Yihuan;LI Bingcheng;HUANG Weizao;YONG Bin;TAO Xiang

作者机构：成都产品质量检验研究院有限责任公司四川成都610199 四川师范大学生命科学学院四川成都610101 中国科学院成都生物研究所四川成都610041 

基　　金：四川省市场监督管理局科技计划项目(SCSJ2020012) 

出 版 物：《中国测试》 (China Measurement & Test)

年 卷 期：2023年第49卷第5期

页      码：74-81页

摘      要：集中空调内部容易滋生细菌、真菌等微生物,成为有害微生物污染传播和扩散的媒介。为对公共场所空调系统有害微生物酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)进行有效检测与预防,该研究建立该菌的高效、特异的PCR检测方法和重组酶等温扩增(recombinase aided amplification,RAA)结合侧流层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD)的快速恒温检测方法。基于序列的相似性比对方法,从酿脓链球菌基因组序列中挖掘到5个特异的DNA区段,长度分别为5348、1098、5287、5369、240 bp。以5369 bp的特异DNA片段为检测靶标,设计PCR引物,优化确定最优退火温度为60.0℃;对PCR引物的特异性进行分析,确定该引物能有效区分酿脓链球菌的多个近缘种;当PCR循环数为25、30、35时,最低可检出400 fg/μL(1.248×105拷贝/μL)、4 fg/μL(1.248×103拷贝/μL)、0.4 fg/μL(1.248×102拷贝/μL)的模板DNA。设计RAA-LFD引物及探针,优化反应体系,确定最优反应温度为37℃;对RAA-LFD引物及探针进行特异性分析,确定该引物能有效区分酿脓链球菌的多个近缘种;当反应时间为5、10、15、20、25 min时,最低可检出400 fg/μL(1.248×105拷贝/μL)、4 fg/μL(1.248×103拷贝/μL)、4×10–1 fg/μL(1.248×102拷贝/μL)、4×10–2 fg/μL(1.248×101拷贝/μL)、4×10–5 fg/μL(1.248×10–2拷贝/μL)。建立的酿脓链球菌的PCR检测体系和RAA-LFD快速检测体系特异性强、灵敏度高、快速高效,为公共场所集中空调系统有害微生物酿脓链球菌的检测、防控提供新的技术选择。

主 题 词：酿脓链球菌 物种特异 基因组DNA PCR检测 RAA-LFD快速检测 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 08[工学] 080402[080402] 0804[工学-材料学] 100402[100402] 10[医学] 

D　O　I：10.11857/j.issn.1674-5124.2022070166

馆 藏 号：203122288...