多靶点沉默CCR5基因载体构建及沉默效果验证

作     者：张雅靖 鲁世金 魏训东 朱其凤 马洁 ZHANG Yajing;LU Shijin;WEI Xundong;ZHUQifeng;MA Jie

作者机构：广西中医药大学研究生院广西南宁530000 广西中医药大学附属瑞康医院中西医结合转化医学中心 北京医院生物治疗中心/国家老年医学中心/中国医学科学院老年医学研究院 

基　　金：国家自然基金地区科学基金项目(82260944) 广西科技基地和人才专项项目(2021AC18006、2021AC19393) 广西研究生教育创新计划项目(YCXJ2021093) 

出 版 物：《联勤军事医学》 (Military Medicine of Joint Logistics)

年 卷 期：2023年第37卷第5期

页      码：367-374页

摘      要：目的筛选沉默CCR5基因的靶点并验证多靶点沉默CCR5基因的效果。方法检索人CCR5基因的cDNA序列,设计针对CCR5 mRNA的siRNA,选择与靶基因结合具有高特异性的3个siRNA序列,合成shRNA双链,构建多靶点沉默CCR5重组质粒。同时合成CCR5过表达质粒。经测序验证后进行质粒慢病毒包装。首先,用CCR5过表达慢病毒转染Jurkat T细胞,实时荧光逆转录定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测CCR5过表达情况。Control组(空白对照)为Jurkat T细胞,将CCR5过表达细胞分组为CCR5-OE组(CCR5过表达)、CCR5-OE-NC组(CCR5过表达阴性对照)、CCR5-OE-沉默组(CCR5过表达沉默)。RT-qPCR和Western bolt检测CCR5沉默重组质粒对目的基因的沉默效果。实验中各项数据的分析选用SPSS软件,作图选用GraphPad Prism软件。结果测序结果证明,CCR5过表达质粒含有目的序列,CCR5沉默重组质粒中含有3个目的靶点序列。RT-qPCR检测CCR5过表达情况显示,细胞CCR5的基因表达显著升高,可进行后续实验。CCR5沉默慢病毒感染后,RT-qPCR和Western bolt检测各组CCR5表达结果显示,多靶点CCR5沉默组的CCR5基因表达水平和蛋白表达水平较CCR5-OE组降低(P均<0.05)。结论成功构建多靶点沉默CCR5基因重组质粒,验证多靶点沉默CCR5基因的有效性,为基因编辑治疗艾滋病提供实验数据。

主 题 词：CCR5 多靶点 基因沉默 载体构建 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100215[100215] 10[医学] 

D　O　I：10.13730/j.issn.2097-2148.2023.05.001

馆 藏 号：203122293...