H9N2亚型禽流感病毒荧光定量PCR方法的建立及初步应用

作     者：胡涛 滕巧泱 申伟霞 张月娥 李国新 李雪松 闫丽萍 姜秀云 李泽君 HU Tao;TENG Qiao-yang;SHENG Wei-xia;ZHANG Yue-e;LI Guo-xin;LI Xue-song;YAN Li-ping;JIANG Xiu-yun;LI Ze-jun

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 吉林农业大学动物科技学院长春130118 

基　　金：公益性行业(农业)科研专项(201003012) 国家国际科技合作重要计划项目(2010DFB33920) 国家高技术研究发展计划(863计划)(2011AA10A200) 中国农业科学院上海兽医研究所中央级公益性科研所基本科研业务费专项资金项目(2013JB06) 上海市科委现代农业领域重点科技攻关项目(12391902000) 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2013年第21卷第2期

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摘      要：H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)是我国主要流行的低致病性禽流感病毒亚型,因而对其进行病毒的监测与诊断显得极其重要。通过比对GenBank上H9亚型禽流感病毒HA基因序列,设计了一个特异性针对H9 AIV HA的探针。特异性和扩增曲线实验结果显示,该探针具有较好的扩增效率,且仅特异性识别H9亚型AIV。通过重组质粒pMD19-T-H9HA 10倍梯度稀释液为模板,进行荧光定量PCR。实验结果表明,本研究所建立的荧光定量PCR方法敏感性能达到100个DNA拷贝数,比传统PCR方法检测敏感性提高了1000倍。此外,本方法还能检测到10EID50个病毒,比传统PCR方法检测敏感性也提高了1000倍。通过批间和批内试验,结果表明,这两个试验的变异系数分别小于5%和1%,说明本研究的方法具有较好的重复性。此外,通过检测人工感染动物咽拭子,结果表明H9亚型AIV荧光定量PCR方法比传统PCR的方法检测敏感性提高了100倍。在临床样品的检测中,H9亚型AIV荧光定量PCR方法检测的阳性率比传统PCR法检测的阳性率提高了大约30%。综上所述,本研究所建立的H9N2亚型禽流感病毒荧光定量PCR方法具有较高的特异性、准确性和敏感性,对H9亚型禽流感疫情防控及其流行病学调查具有积极的科学意义。

主 题 词：H9N2 禽流感病毒 定量PCR 敏感性 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-6422.2013.02.002

馆 藏 号：203122333...