CRISPR/Cas9技术构建MMACHC基因c.80A>G(p.Q27R)纯合突变甲基丙二酸血症小鼠模型

作     者：王薇 毛莹莹 郑萍 程沛迪 张文超 吴小兵 马文豪 陈倩 张学 Wang Wei;Mao Yingying;Zheng Ping;Cheng Peidi;Zhang Wenchao;Wu Xiaobing;Ma Wenhao;Chen Qian;Zhang Xue

作者机构：首都儿科研究所附属儿童医院神经内科北京100020 北京瑞希罕见病基因治疗技术研究所北京100176 中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院医学遗传学系北京100005 

基　　金：国家重点研发项目(2022YFC2703903) 北京亦城合作发展基金会科研项目罕见病相关课题资助公益项目(YJXJ-JZ-2021-0014-19) 

出 版 物：《中国医学前沿杂志（电子版）》 (Chinese Journal of the Frontiers of Medical Science(Electronic Version))

年 卷 期：2023年第15卷第6期

页      码：34-39页

摘      要：目的利用CRISPR/Cas9技术构建MMACHC基因c.80A>G(p.Q27R)纯合突变的cblC型甲基丙二酸血症合并同型半胱氨酸血症小鼠模型。方法利用CRIPSR/Cas9基因编辑技术,将小鼠MMACHC基因第80位碱基由碱基A突变为碱基G,在靶位点区域设计单链导向RNA(single-guide RNA,sgRNA),构建打靶载体,将Cas9/sgRNA及打靶载体显微注射到小鼠受精卵中,培育获得F0代小鼠,以小鼠鼠尾鉴定基因型,将点突变阳性F0代小鼠与野生型小鼠交配获得具有稳定基因型的F1代小鼠,F1代小鼠交配繁育获得MMACHC基因c.80A>G纯合突变型小鼠,对纯合型小鼠、杂合型小鼠、野生型小鼠进行血代谢产物甲基丙二酸和总同型半胱氨酸检测。结果获得12只MMACHC基因c.80A>G点突变阳性的F1代小鼠,并进行培育繁殖扩大种群,获得纯合突变型小鼠,纯合型小鼠无早期死亡,其血甲基丙二酸、总同型半胱氨酸水平显著高于杂合型和野生型小鼠(P0.05)。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建MMACHC基因c.80A>G(p.Q27R)纯合突变的cblC型甲基丙二酸血症合并同型半胱氨酸血症小鼠模型。

主 题 词：CblC型甲基丙二酸血症 MMACHC基因 CRISPR/Cas9 小鼠模型 

学科分类：1008[医学-中药学类] 1006[医学-中西医结合类] 100602[100602] 10[医学] 

D　O　I：10.12037/YXQY.2023.06-07

馆 藏 号：203122402...