猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体双重荧光PCR检测方法的建立

作     者：于新友 李天芝 李书光 刘新江 李振伟 沈志强 肖跃强 YU Xin-you;LI Tian-zhi;LI Shu-guang;LIU XIN-jiang;LI Zhen-wei;SHEN Zhi-qiang;XIAO Yue-qiang

作者机构：山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 威海市文登区动物疫病预防控制中心山东威海264400 

基　　金：山东省重大科技创新工程项目(2019JZZY010720) 山东省自然科学基金项目(ZR2014CM047) 

出 版 物：《中国兽医杂志》 (Chinese Journal of Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第59卷第6期

页      码：60-64页

摘      要：为了建立快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪肺炎支原体(Mhp)的双重荧光PCR检测方法,本试验根据NCBI数据库中的PRRSV ORF7和Mhp P36基因,分别设计引物和TaqMan探针,通过优化扩增反应条件,建立PRRSV和Mhp的双重荧光PCR检测方法;分析所建立PCR方法的特异性、敏感性和重复性,并初步应用于临床样品检测。结果显示,25μL PCR反应体系中各引物最佳添加量:PRRSV-F 1.5μL、PRRSV-R 1.0μL、PRRSV-P 0.8μL、Mhp-F 1.2μL、Mhp-R 1.3μL、Mhp-P 0.7μL。优化后的PCR反应程序:50℃反转录20 min,95℃预变性2 min,95℃变性5 s,55℃退火10 s,72℃延伸20 s (此处收集荧光),40个循环。建立的双重荧光PCR方法特异性较好,与其他猪常见病原体无交叉反应;检测PRRSV和Mhp的敏感性分别为4.2拷贝/μL和9.6拷贝/μL;批内和批间变异系数均不高于2%,具有很好的重复性。因此,本试验建立的双重荧光PCR方法可同时检测PRRSV和Mhp,为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪支原体肺炎(MPS)的诊断和防控工作提供支持。

主 题 词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 猪肺炎支原体 双重荧光PCR 检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203122402...