猴免疫缺陷病毒荧光定量聚合酶链反应检测标准品的体外合成

作     者：何金洋 符林春 陈媛 邓文娣 周映云 周利平 HE Jinyang;FU Linchun;CHEN Yuan;DENG Wendi;ZHOU Yingyun;ZHOU Liping

作者机构：广州中医药大学热带医学研究所广州510405 广州中医药大学人文社科学院广州510405 

出 版 物：《广州中医药大学学报》 (Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine)

年 卷 期：2007年第24卷第4期

页      码：351-354页

摘      要：【目的】合成猴免疫缺陷病毒(SIV)荧光定量检测标准品,并总结出核糖核酸(RNA)标准品体外合成的基本原则。【方法】首先寻找到SIV保守序列,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆于T载体,测序,然后在所测得的SIV序列中进一步寻找保守序列,设计带有T7启动子的引物,PCR扩增,将所获得的PCR产物凝胶回收纯化,用T7RNA聚合酶进行体外合成RNA,再用PCR和电泳检测验证。【结果】通过数次引物调整,最终成功合成了SIV荧光定量PCR标准品。【结论】SIV荧光定量标准品的成功合成必须遵守以下4条基本原则:①必须选择保守序列;②在选择保守序列之后还需要搜索是否含有较多潜在的终止密码或者起始密码,设计引物使这些中止或起始密码排除在PCR目标产物之外;③必须注意将启动子(如T7启动子)挂在适当的引物上,以保证所合成的RNA模板与所要定量检测的RNA模板一致,而不是互补;④合成好RNA后必须检测,以保证不含其他RNA或者未消化完毕的DNA。

主 题 词：猴获得性免疫缺陷综合征 RNA病毒 逆转录聚合酶链反应 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-3213.2007.04.026

馆 藏 号：203122437...