多重实时荧光PCR相对定量法快速诊断唐氏综合征

作     者：高斌 肖白 邹起练 黄尚志 王立荣 钮淑兰 闫梅 雷箴 贾兴元 王战勇 袁海昕 吴燕 刘敬忠 GAO Bin;XIAO Bai;ZOU Qi-Lian;HUANG Shang-Zhi;WANG Li-Rong;NIU Shu-Lan;YAN Mei;LEI Zhen;JIA Xing-Yuan;WANG Zhan-Yong;YUAN Hai-Xin;WU Yan;LIU Jing-Zhong

作者机构：首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心北京100020 福建医科大学细胞生物学与遗传学系福州350004 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传室北京100005 北京大学第一医院中心实验室北京100034 

基　　金：北京市自然科学基金资助项目(编号:JS96004)资助~~ 

出 版 物：《遗传》 (Hereditas（Beijing))

年 卷 期：2007年第29卷第8期

页      码：934-938页

摘      要：为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断,选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针,在同一个反应管中进行扩增。以相对定量指标△CT值区分唐氏综合征患者与正常人。采用EB病毒转化技术,把唐氏综合征患者外周血B淋巴细胞转化成永生淋巴母细胞系作为标准品。通过优化反应条件,使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致,接近100%,模板浓度在3～300ng/μL范围内,△CT值的变异系数小于15%,浓度在30ng/μL时,变异系数最小(<10%),以该浓度的DNA作为模板进行批内和批间实验的△CT值重复性好,变异系数分别为9.8%和13.3%。运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常人的血标本,正常人△CT值范围是-1.90～-1.30,患者的△CT值范围是-2.95～-2.15,两组之间无交叉重叠,有明显差异(P<0.001)。唐氏综合征患者永生细胞系建系成功,染色体核型和DNA分析表明建系前后遗传是稳定的。因此,实时荧光定量PCR比较△CT值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的。

主 题 词：唐氏综合征 荧光定量PCR 相对定量 △CT值 永生细胞系 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100211[100211] 100215[100215] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.1360/yc-007-0934

馆 藏 号：203122440...