敲低内源性PERK基因对犬细小病毒复制的影响

作     者：李艳超 郝香琪 周沛 LI Yanchao;HAO Xiangqi;ZHOU Pei

作者机构：华南农业大学兽医学院广东省宠物工程技术研究中心广东广州510642 华南农业大学兽医学院广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室广东广州510642 

基　　金：广东省自然科学基金资助项目(2022A1515010733,2023A1515012171) 广州市科技局基础与应用基础专题基金资助项目(一般项目)(SL2022A04J00674) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第43卷第6期

页      码：1149-1155页

摘      要：利用新型CRISPR interference(CRISPRi)技术进行蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase, PERK)目的基因PERK的敲低。首先,利用慢病毒包装系统经嘌呤霉素筛选后构建稳定表达dCas9-KRAB蛋白的MDCK细胞株。然后,设计靶向PERK转录起始位点(transcription start site, TSS)的特异性小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),向该稳转细胞株转染表达sgRNA的质粒,通过qPCR检测PERK的mRNA表达水平;同时,内质网应激激活剂衣霉素(tunicamycin, Tu)处理该细胞后,通过qPCR检测PERK通路下游GRP78、GRP94、ATF4、GADD34和CHOP等基因mRNA的表达水平。最后,将犬细小病毒2型(canine parvovirus type 2,CPV-2)接种于PERK敲低的MDCK细胞株,通过绝对定量PCR测定不同时间点CPV-2的复制水平。结果表明,敲低PERK基因表达后,CPV-2的复制水平显著下降,说明PERK参与调控CPV-2的复制。以上结果为进一步探究内质网未折叠蛋白反应(endoplasmic reticulum unfolded protein response, UPR^(ER))对CPV-2复制的影响及病毒与宿主相互作用的分子机制研究奠定了基础。

主 题 词：PERK CRISPRi CPV-2 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.06.05

馆 藏 号：203122441...