鸡DEC-205结合肽的筛选及体外鉴定

作     者：马孙婷 谭飞 王晓丽 马莉莉 徐彬 吕立新 冯志新 陈佩佩 欧阳伟 MA Sunting;TAN Fei;WANG Xiaoli;MA Lili;XU Bin;LYU Lixin;FENG Zhixin;CHEN Peipei;OUYANG Wei

作者机构：江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 启东市吕四港镇农业综合服务中心江苏启东226200 宿迁市宿城区畜牧兽医站江苏宿迁223800 南京农业大学动物医学学院江苏南京210014 

基　　金：江苏省农业科技自主创新资金资助项目(CX(20)3095) 国家自然科学基金资助项目(31772723,32072872) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第43卷第6期

页      码：1270-1276页

摘      要：为筛选鸡DEC-205的优势结合肽,以小鼠CD8α信号肽、鸡DEC-205具有结合作用的3个C型凝集素样结构域(CTLD-4、CTLD-5和CTLD-6)、人IgG1 Fc和His标签作为目的基因,设计构建重组表达质粒pcDNA3.1-DEC-205-Fc-his和pcDNA3.1-Fc-his(用于对照);转染293t细胞,Western blot鉴定蛋白表达;镍亲和层析法纯化蛋白,用于噬菌体线性12肽库筛选结合肽,protein G/A交替进行了3轮液相淘选,对第3轮噬斑提取DNA测序并统计肽重复率。对重复率较高的短肽进行合成,ELISA及荧光显微镜观察鉴定肽与重组蛋白的结合效果。Western blot结果显示,转染重组质粒的293t细胞裂解液和细胞上清均可表达目的蛋白,DEC-205-Fc-his蛋白约90 kDa, Fc-his蛋白约35 kDa,与预期大小符合,纯化的蛋白作为靶标进行3轮淘选后,15条序列出现重复,其中DLPVNSVIFPFR(DL)重复率最高(达到6.41%)。ELISA及荧光检测结果显示,合成的DL短肽可结合表达DEC-205-Fc-his的细胞,与表达Fc-his的细胞亲和性较低。筛选获得的DL短肽经体外鉴定,结果显示是鸡DEC-205的潜在配体,相关结果将为研发鸡DEC-205新型靶向策略奠定基础。

主 题 词：鸡DEC-205 结合肽 噬菌体展示12肽库 液相淘选 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.06.23

馆 藏 号：203122445...